讲解荧光定量PCR检测试剂盒实验方法
更新时间：2017-12-12 点击次数：848次
荧光定量PCR检测试剂盒实验方法：
1．取增菌液1ml加到1.5ml无菌离心管中，10,pm离心5min，弃去上清；加入50ul DNA提取液，充分混匀后沸水浴5 min，
13,pm离心5min，取上清液进行检测或保存于-20℃以待检测。
2．将PCR反应液置室温平衡，融化后取Taq酶,按管加入Taq酶，即每个测试反应体系配制为：PCR反应液22.5ul+0.4ul
Taq酶。
3．加入模板：将保存在-20℃的核酸提取物置室温解冻，以13,pm离心5min。阴、阳性对照使用前置室温解冻。在每个
PCR反应管中分别加入步骤1中处理过的模板或阴、阳性对照各2ul，盖好管盖，置于PCR仪上，记录相应样品号。
4．上机扩增、检测区：反应条件为95℃：3min，1个循环；95℃：5sec，60℃：40sec（信号采集），40个循环。反应体系设为25ul。对于多通道荧光PCR仪，信号采集时设定为Fam荧光素。
试剂盒中含有沙门氏菌特异的引物，当样品中含有沙门氏菌时，前增菌后提取的沙门氏菌DNA通过PCR成指数扩增，在反应过程中沙门氏菌特异的荧光探针跟靶核酸杂交,同时被Taq酶水解,把探针上的荧光基团和淬灭基团分开,从而通过荧光增量来实时判断沙门氏菌的存在。
试剂盒的保存条件及有效期
1．本试剂盒于-20℃保存。2．有效期为6个月。
