1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

8 nmol/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

4 nmol/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2 nmol/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

1 nmol/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

0.5 nmol/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，

然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

【注意事项】

1.包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时，应平衡至室温后，方可开封启用。未使用完的板条应即时放回有干燥剂的自封袋中，4℃密封保存。

2.滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀，首滴弃去；滴加试剂时瓶身应保持竖直。

3.瓶盖每次使用后要盖紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

4.孵育时，推荐使用水浴箱。如无水浴箱，可取密封湿盒放入37℃温箱内使用。

5.用弃的试剂盒及样本都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性，须小心使用。