关于大鼠TGF-β1和bFGF的ELISA试剂盒实验研究方法：

1、建立膀胱出口部分梗阻(PBOO)模型：取30只3月龄雌性Wistar大鼠随机分为3组，分笼饲养。分别为Sham组：8只，即假手术组；PBOO 2周组：11只，膀胱出口部分梗阻2周；PBOO 6周组：10只，膀胱出部分口梗阻6周。采用近端尿道结扎的方法建立Wistar大鼠PBOO模型。

2、模型成功后离体膀胱测重。

3、离体逼尿肌肌条收缩实验：分别于PBOO模型建立2周及6周后，断头处死 大鼠，Kerbs营养液下制作离体逼尿肌肌条(8×2 mm)，分别用浓度为10<'-5>mM、10<'-4>mM、10<'-3>mM、lO<'-2>mM的卡巴可(Carbamylmethylcholine，Carbachol)刺激 肌条，记零张力改变。张力改变经拉力传感器与四通道多功能生理信号放大器 相连、检测信号输入计算机并绘制曲线。结果经MFlab软件分析。采用单因 素方差分析检验比较三组离体逼尿肌收缩功能。

4、RT-PCR方法测定逼尿肌中TGFβlmRNA、bFGFmRNA的表达：取Sham组、PBOO 2周组、PBOO 6周组共29例膀胱逼尿肌标本，采用RT-PCR的 方法分别检测逼尿肌TGFBlmRNA、bFGFmRNA的表达水平。用方差分析比 较各组间TGFBlmRNA、bFGFmRNA的表达差异，Spearman等级相关分析 二者mRNA表达水平与与逼尿肌收缩功能之间的关系。从RNA水平探讨 BOO后膀胱逼尿肌中上述两种生长因子的表达水平的变化。

5、用ELISA的方法测定三组大鼠尿液中TGFβ1、bFGF的表达水平：特制代谢 笼收集各组大鼠24h的尿液，采用ELISA方法测定各研究对象尿液中TGFβ1、bFGF的水平。采用方差分析比较各组结果的差异，Spearman等级相关分析 尿浓度水平与逼尿肌中相应的mRNA表达水平之间的关系。

结果： 1、膀胱测重：Sham组、PBOO 2周组、PBOO 6周组的膀胱湿重依次为：100.5±9.0rag、196.6±19．4mg、410.8±25.2rag。PB002周组大于对照组，PBOO 6周组大于PBOO 2周组，三组相比较均有明显的统计学差异(P<0.05)。

2、Carbachol刺激下各组逼尿肌收缩功能：10<'-5>mM浓度Carbachol刺激下Sham组、PBOO 2周组、PBOO 6周组三组逼尿肌的zui大逼尿肌收缩力依次为0.23±0.04g、0.24±0.03g、0.19±0.02g。10<'-4>mM浓度Carbachol刺激下Sham组、PBOO 2周组、PBOO 6周组逼尿肌的zui大逼尿肌收缩力依次为0.85±0.18g、0.96±0.11g、0.65±0.06g。10<'-3>mM浓度Carbachol刺激下Sham组、PBOO 2周组、PBOO 6周组三组逼尿肌的zui大逼尿肌收缩力依次为1.82±0.19g、1.98±0.21g、1.12±0.08g。10<'-2>mM浓度Carbachol刺激下Sham组、PBOO 2周组、PBOO 6周组三组逼尿肌的zui大逼尿肌收缩力依次为2.12±0.26g、2.16±0.21g、1.40±0.19g。与Sham组相比，PBOO 2周组大鼠在上述指标上高于Sham组，在Carbachol浓度10<'-4>、10<'-3>mM时两组比较有显著性差异(P<0.05)；在其浓度为10<'-5>、10<'-2>mM时差异无统计学意义(P>0.05)。与Sham组相比，PBOO 6周组大鼠上述指标均小于Sham组和PBOO 2周组组，且有显著性差异(P<0.05)。

3、TGFBImRNA、bFGFmRNA在各组逼尿肌中的表达情况：TGFBlmRNA在 Sham组、PBOO 2周组、PBOO 6周组三组的表达依次为0.3212±0.01124、0.3426±0.0956、0.7236±0.2134，PBOO 2周组大于Sham组，但两组无显著性差异(P>0.05)；PBOO6周组大于PBOO2周组和Sham组，且统计学检验均有显著性差异(P<0.005)。bFGFmRNA在Sham组、PBOO2周组、PBOO6周组的表达依次为0.1023±0.0526、0.2118±0.00656、0.3812±0.1269，PBOO2周组大于Sham组，PBOO 6周组大于PBOO 2周组。三者比较均有显著性差异(P<0.05)。

4、尿液中TGFBl、bFGF的水平：Sham组、PBOO 2周组、PBOO6周组尿液中TGFB1表达依次为106.72±21.82μg/molCr、130.55±48.96μg/molCr、606.41±215.95μg/molCr，PBOO 2周组组高于Sham组组，但两组之间无显著性差异(P>0.05)；PBOO 6周组明显高于PBOO 2周组，两组之间比较00有显著性差异(P<0.05)。bFGF在尿液中表达个体差异大，且表达水平很低，因此未作统计学分析。

5、相关性分析：离体逼尿肌收缩力(取各梯度浓度Carbachol刺激下收缩力的算术平均值)与其TGFB1mRNA、bFGFmRNA表达水平的相关性分析，与TGF61mRNA相比，Spearman等级相关性检验n=21，r(等级相关系数)=-0.4132，P<0.05，呈显著中度负相关；与bFGFmRNA相比，Spearman等级相关性检验n＝21，r(等级相关系数)=—0.7022，P<0.05，呈显著高度负相关。 逼尿肌TGFB1mRNA、bFGFmRNA表达水平与尿液中TGFB、bFGF浓度的相关性分析：Spearman等级相关性检验逼尿肌TGFB1mRNA表达水平与尿液中TGFB1呈显著中度正相关，n=21，(等级相关系数)r=0.6632，P<0.05。由于尿液中bFGF表达阳性率低和个体表达水平变异大，未作相关性分析。

结论： 1、大鼠PBOO后膀胱湿重量逐渐增加，收缩功能在重度PBOO组明显下降。 2、随着大鼠PBOO的进展，其膀胱逼尿肌bFGFmRNA表达水平持续升高。但是TGFB1mRNA在失代偿阶段表达才明显升高。 3、尿液中TGFB1和逼尿肌中TGFB1mRNA表达呈中度正相关。 4、尿液中TGFB1在大鼠重度PB00时呈强表达，有可能成为一个预测BOO后膀胱逼尿肌的收缩功能和BOO解除后代偿储备能力的一个指标。 5、TGFβ、bFGF均参与了BOO后膀胱逼尿肌功能障碍的病理生理进程。应用二者的单克隆抗体或者生长因子抑制剂治疗BOO可能阻止或延缓该进程的进展。