实时荧光定量PCR检测的技术及原理
更新时间：2020-08-24 点击次数：837次
一：
实时荧光定量PCR检测的技术：
1、是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。
2、具有操作简便、快速，高通量，而且高敏感性等特点，该技术在分子诊断、分子生物学研究、动植物检疫以及食品安全检测等方面有广泛的应用。
3、不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，具有灵敏度高、特异性强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。目前，该技术已广泛应用于分子生物学、医学等学科和基础研究领域，特别是在现代农业转基因作物的定性检测、品系鉴定、转基因成分含量的检测中发挥着重要作用。
二：实时荧光定量PCR检测的原理：
1、是以荧光共振能量转移原理为基础。荧光共振能量转移原理是当一个荧光分子(供体分子)的荧光光谱与另一个荧光分子(受体分子)的激发光谱重叠时，供体荧光分子自身的荧光强度衰减，受体荧光分子的荧光强度增强。
2、Ct值是指每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。Ct值是实时荧光PCR中一个很关键的因素。
3、每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可做出标准曲线。
4、因此，根据荧光探针的发光基团所发出的荧光强度与PCR产物的数量呈对应关系，只要对荧光信号进行“实时”检测并获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。与普通PCR相比，可以利用荧光信号实时监测PCR反应过程中每一个循环扩增产物的变化，可以对初始模板量进行定量分析。
简单地说，基本原理就是样本核酸扩增呈指数增长，在反应体系和条件*一致的情况下，样本DNA含量与扩增产物的对数成正比，由于反应体系中的荧光染料或荧光标记物(荧光探针)与扩增产物结合发光，其荧光量与扩增产物量成正比，因此通过荧光量的检测就可以测定样本核酸量。
总结：实时荧光定量PCR检测的技术及原理小编就知道这么多，看完本文您就应该有了基本的认识和了解相信大家都明白了吧！总的来说，希望对大家有所帮助。
