明胶酶谱法MMP-2&MMP-9检测试剂盒检验原理

明胶酶谱法MMP-2&MMP-9检测试剂盒检验原理

信帆生物主营产品: 质控品，干扰物质，抗体抗原，elisa试剂盒，动物血制品，生化试剂盒等。实验代做服务：HE染色/特殊染色/技术服务、免疫组化实验服务、Western blotting实验服务、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR）、酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测等。

简介：

基质金属蛋白酶 (MMP) 属于金属蛋白酶家族，该家族由至少 20 个成员组成，并且已知参与细胞外基质蛋白的代谢。基质金属蛋白酶是一类活性依托锌、钙离子发挥作用的蛋白水解酶，在生物体内分布广泛。这类酶核心作用为分解代谢细胞外基质物质，深度参与胚胎生长发育、机体组织修复、创面愈合以及血管新生等生理活动，保障机体组织形态与结构维持正常状态。该物质的活性水平处于动态调控之中，一旦表达量与活性出现异常紊乱，就会损伤组织固有屏障。其功能失调和肿瘤侵袭转移、关节病变、血管硬化、器官纤维化等诸多病症息息相关，酶与体内抑制物质相互制衡，共同守护机体生理运作平衡。MMP 可通过酶谱法广泛检测。本试剂盒提供了一个简单的酶谱电泳系统，用于检测血液、体液、分泌物、细胞裂解液、细胞培养基等样品中的MMP2,MMP9酶谱及活性。

检验原理：

本方法借助 SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳联合凝胶染色技术，能够同步检测 MMP-2、MMP-9 活性以及无活性前体酶原谱系，检测灵敏度可达nM级别，检测性能优于 ELISA 检测方式。

实验预先制备混合明胶底物的电泳凝胶，将待测生物样本加入凝胶体系完成电泳分离。电泳体系内的SDS可与基质金属蛋白酶可逆结合，破坏蛋白空间构象，暂时抑制酶的水解活性，保障蛋白依据分子量差异完成有效分离。电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，MMP恢复活性，凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。