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油红O染色液实验流程及注意事项！
脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙MI等)。人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位；2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。中性脂肪染色经常采用苏丹II、苏丹III、苏丹IV、苏丹黑B、油红O法等，传统方法采用苏丹染料，最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色，油红O是很强的脂溶剂和染脂剂，较易与甘油三脂结合呈小脂滴状，与磷脂结合力稍差，其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。
油红O染色液(培养细胞专用)主要用于显示人工培养细胞的脂肪变性和类脂质的异常沉着，细胞内出现多数中性脂肪滴，鉴别培养细胞中所发生的变化及其性质，标本不采用含有乙醇的固定液，脂肪的阳性染色结果呈橘黄至红色，但具体颜色因脂质浓度而定。
产品名称：油红O染色液（细胞专用）
产品规格：4×20ml
储存条件：4℃
有效期：12个月
用途：专门用于脂肪/脂滴染色
产品组成
名称 | 4×20ml | 4×50ml | Storage | |
试剂(A): ORO Fixative | 20 ml | 50 ml | RT 避光 | |
试剂(B): ORO Stain | B1: ORO Stain A | 12 ml | 30 ml | 4℃ 避光 |
B2: ORO Stain B | 8 ml | 20 ml | RT | |
按B1:B2=3:2比例混合静置10min, 即为ORO Stain，不宜提前配制；配好后，若有沉淀， 过滤之后再使用。 | ||||
试剂(C): Mayer苏木素染色液 | 20ml | 50 ml | 4℃ 避光 | |
试剂(D): ORO Buffer | 20ml | 50 ml | RT | |
自备材料：
60%异丙醇、蒸馏水
实验步骤（仅供参考）：
一、培养细胞
1、 移除细胞培养基，用PBS洗两次，加ORO Fixative固定液固定20-30min。
2、 弃去固定液，用蒸馏水洗2次。
3、 加入60%异丙醇浸洗5min。
4、 弃去60%异丙醇后加入新配制好的ORO Stain，浸染10-20min。
5、 弃去染色液，水洗2-5次，直到无多余染液。
6、 加入Mayer苏木素染色液，复染核1-2min。弃去染液后水洗2-5次。
7、 入ORO Buffer 1min，弃去。
8、 加入蒸馏水覆盖细胞并在显微镜下观察。
二、细胞涂片
1、 制备新鲜骨髓、血液涂片，入ORO Fixative固定10～15min。
2、 取出涂片，放于流通的空气中10～15min。
3、 入新配制好的ORO Stain，浸染15min。
4、 入60%异丙醇漂洗20～30s，流水冲洗，入蒸馏水稍微清洗。
5、 入Mayer苏木素染色液，复染核2min。
6、 入ORO Buffer 1min。
染色结果：
中性脂肪 | 橙红色或橘红色 |
磷脂 | 粉红色 |
细胞核 | 蓝色 |
注意事项:
1、 ORO染色液不够稳定，易产生沉淀，不宜提前配制。
2、 Mayer 苏木素染色液复染时间不能过长。
3、 染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5、本产品仅供科研实验用，不做其它用途！
