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6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒太棒了!
更新时间:2017-11-20   点击次数:1068次

6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒太棒了!

测定意义:
G6PDH(EC 1.1.1.49)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关
键酶,催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯,同时将NADP+还原为NADPH,供
生物合成及维持细胞内的还原状态用。因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程
度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
 

测定原理:
G6PDH 催化NADP+还原生成NADPH,在340 nm 下测定NADPH 增加速率。
 

需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸
馏水。
 

试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体47.5 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存;
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存;

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测定步骤:
1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、 将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解;在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)
水浴10min 以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、 在1mL 石英比色皿中加入50μL 样本和950μL 试剂一,混匀后立即记录340nm 处1min
后吸光值A1 和 6min 后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
 

注意:若ΔA 大于0.5,需将酶液用提取液稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。或将反应
时间缩短至2min,使A2-A1 小于0.5,可提高检测灵敏度。

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