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葡聚糖凝胶 G 系列使用
更新时间:2021-01-19   点击次数:576次

上海信帆生物供应葡聚糖凝胶 G 系列产品,使用说明如下:

葡聚糖凝胶 G 系列使用说明

 

葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶,含有大量的羟基,很容易在水中和电解质溶液中溶胀。亲水基质使其非特异性吸附小化,并在生物分子分离期间得到较高的回收率。G 型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度,因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

 

一:使用方法

Sephadex 系列产品以干粉形式存在,使用前必须溶胀,在膨胀期间应避免过度搅拌,因为它可能破坏填料,不要使用磁力搅拌器。

 

1、填料的准备

1)将填料在过量去离子水或缓冲液中,室温条件下膨胀 24 小时,或用热水膨胀 1 小时。洗脱缓冲液不应含有高粘度的试剂。溶胀过程中,如果上层有漂浮物,请去除。

2)将溶胀好的填料,所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度,对所有的缓冲液进行脱气处理。

 

2、装柱

1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。

2)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。

3)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。

4)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填 料大耐压)。

 

3、平衡

上样前平衡层析柱至少 5-10 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的 pH 值和电导值等于 上柱的 Buffer pH 值和电导值)。

 

4、上样

样品一定要离心或过滤后(0.45um 滤膜)上样。 凝胶过滤的上样量一般为不大于 5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在 1-2%的柱床体积,视分 离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到 20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱子越高,分 离效果相应越好,但是,柱高过高的凝胶柱会引起较大的反压,也应当尽可能避免。难分离物质要有一定 柱高和流速控制,脱盐时高径比为 51 即可。

 

5、洗脱方法

可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱。

 

6、在位清洗(CIP

凝胶使用十次后作一次 CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是用 0.1 M 氢氧化 钠洗 2 个柱体积,再以至少 10 个柱体积平衡缓冲液再生。

 

二:保存

未处理的填料,室温密闭保存。使用完的填料,用纯水将盐分*冲洗,后保存在 20%乙醇中,4 保存。

 

三:注意事项:

1)上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的 正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。

2)在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。

3)不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。

 上海信帆生物供应葡聚糖凝胶 G 系列产品。