信帆生物：小鼠eNOS WB实验技术服务

信帆生物：小鼠eNOS  WB实验技术服务

信帆生物主营产品: 质控样品，干扰物质，抗体抗原，elisa试剂盒，动物血制品，生化试剂盒等。实验代做服务：HE染色/特殊染色/技术服务、免疫组化实验服务、Western blotting实验服务、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR）、酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测等。

内皮型一氧化氮合酶（eNOS），也被称为一氧化氮合成酶3（NOS3）或组成型NOS（cNOS），由位于7号染色体7q35-7q36区域的NOS3基因编码的酶。这种酶是合成一氧化氮（NO）的三种异构体之一，一氧化氮是一种小型气态和亲脂性分子，参与若干生物过程。 其他异构体包括神经元一氧化氮合酶（nNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS），前者在大脑特定的神经元中组成性表达，后者的表达通常在炎症性疾病中诱发。

 服务内容

1、样本接收、样本状态核查

2、组织 / 细胞总蛋白提取；磷酸化样本同步添加蛋白酶 + 磷酸酶抑制剂，冰上操作防止去磷酸化

3、BCA 蛋白定量，统一上样量

4、SDS-PAGE 电泳（8% 分离胶，适配 140 kDa 大分子蛋白）、湿转至 PVDF 膜

5、封闭、一抗孵育（可客户自备抗体或我方提供验证过抗小鼠 eNOS 抗体）、HRP 二抗孵育、TBST 洗涤

6、ECL 化学发光成像，原始条带采集

7、灰度定量分析，内参校正（GAPDH/β-actin 可选）

8、出具完整实验报告

样本运输要求：

1、小鼠组织：≥30 mg / 份，离体后迅速液氮速冻，-80℃保存，严禁反复冻融；血管样本尽量剔除结缔组织

2、细胞样本：≥5×10⁶/ 样本，收集后 - 80℃冻存

3、蛋白裂解液样本：蛋白浓度≥1 μg/μL，总量≥150 μg / 样本，-80℃保存

4、送检包装：干冰运输，标注分组信息

采用 Western blot 检测小鼠组织 eNOS 蛋白表达。液氮冻存小鼠组织冰上裂解，裂解液添加蛋白酶抑制剂，磷酸化检测样本额外加入磷酸酶抑制剂；提取总蛋白后 BCA 定量，取等量蛋白进行 8% SDS-PAGE 电泳，湿法转印至 PVDF 膜；5% 脱脂牛奶室温封闭，eNOS 一抗 4℃摇床孵育过夜，HRP 标记二抗室温孵育，ECL 化学发光成像采集条带，以内参蛋白校正灰度值，分析 eNOS 相对表达水平。磷酸化 eNOS 检测采用 5% BSA 封闭，其余操作同总蛋白。