信帆生物提供：小鼠Bdkrb2 WB实验技术服务

信帆生物提供：小鼠Bdkrb2 WB实验技术服务

信帆生物主营产品: 质控样品，干扰物质，抗体抗原，elisa试剂盒，动物血制品，生化试剂盒等。实验代做服务：HE染色/特殊染色/技术服务、免疫组化实验服务、Western blotting实验服务、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR）、酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测等。

蛋白免疫印迹（Western Blot, WB）用于检测小鼠组织 / 细胞样本中Bdkrb2（B2R，缓激肽 B2 受体）蛋白表达水平。Bdkrb2 属于七跨膜 GPCR 膜蛋白，蛋白分子量约 42 kDa（糖基化修饰后常偏移至 45–50 kDa 区间）；膜蛋白疏水性强，提取与电泳过程相比胞浆蛋白更容易降解、聚集，样本前处理是实验关键点。

实验原理（仅供参考）

1、组织 / 细胞总蛋白提取，BCA 法测定蛋白浓度；

2、SDS-PAGE 凝胶电泳：蛋白按分子量大小分离；

3、转膜：电场作用下将凝胶中蛋白转移至 NC 膜或 PVDF 膜；

4、封闭：5% 脱脂牛奶 / BSA 封闭膜上非特异性结合位点；

5、一抗孵育：抗小鼠 Bdkrb2 特异性一抗结合膜上目标蛋白；

6、二抗孵育：HRP 标记二抗与一抗特异性结合；

7、ECL 化学发光，显影采集条带；以内参蛋白（GAPDH、β-actin）做参照，半定量分析 Bdkrb2 蛋白相对表达量。

实验操作步骤（仅供参考）

1、蛋白提取 小鼠新鲜组织冰上充分研磨，加入预冷 RIPA 裂解液（临用添加 PMSF 与蛋白酶抑制剂）；冰上裂解 30 min；4℃ 12000 g 离心 15 min，取上清。膜蛋白富集样本按试剂盒说明书操作。

2、蛋白定量与变性 BCA 法检测蛋白浓度；取等量蛋白样品，加入蛋白上样缓冲液，95℃沸水浴变性 5 min。

3、SDS-PAGE 电泳 浓缩胶 80 V，分离胶 120 V 恒压电泳，至溴酚蓝跑至胶底附近停止。

4、转膜 湿转体系：恒流 200 mA，转膜 90 min；或半干转，根据仪器调整。PVDF 膜提前甲醇活化。

5、封闭 5% BSA-TBST 室温封闭 1 h（膜蛋白不推荐脱脂奶，降低非特异背景）。TBST 洗涤 3 次，每次 5 min。

6、一抗孵育 Bdkrb2 一抗按说明书稀释，4℃摇床孵育过夜；TBST 充分洗涤 3 次，每次 5 min。

7、二抗孵育 HRP 标记二抗室温摇床孵育 1 h；TBST 洗涤 3 次，每次 5 min。

8、发光检测 膜表面滴加新鲜 ECL 发光液，化学发光成像系统采集条带。

常见问题

1、蛋白降解：全程冰上操作，裂解液必须加足量蛋白酶抑制剂；取材后迅速冻存于 - 80℃，避免反复冻融。

2、条带位置异常：Bdkrb2 理论 42 kDa，糖基化后往往在 45–50 kDa 出现主带；部分样本可见二聚体（~80–90 kDa），属于膜蛋白常见现象。

3、无条带 / 信号弱：膜蛋白丰度偏低；优先富集膜蛋白；一抗物种特异性必须确认可识别小鼠 Bdkrb2；转膜不足。

4、背景高：改用 BSA 封闭；增加洗涤次数；降低一抗浓度。

5、多杂带：样本降解；一抗特异性不足；可设置 Bdkrb2 敲除小鼠组织作为阴性对照。