NI-NTA琼脂糖凝胶6FF的正确操作！

NI-NTA琼脂糖凝胶6FF的正确操作！

Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF是用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由6%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得.它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6×His可与Ni2+螯合，从而使His标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液的温和洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。该纯化介质与His标签蛋白具有*的亲和力，可达5-20mg/ml。可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95％。Ni-NTA可再生4-6次，重复使用。

Ni NTA琼脂糖凝胶6FF预先偶联Ni2+离子。通常，Ni2+是用于纯化重组组氨酸标签蛋白的优选金属离子，用咪唑进行洗脱。我们建议在含0.5-1.0 M NaCl的缓冲液，中性至弱碱性pH 7-8，这样的条件下结合，经常使用磷酸钠缓冲液。也可以使用Tris-HCl，但是在金属-蛋白质亲和非常弱的情况下应该避免，因为它可以降低结合强度，在缓冲液中避免螯合剂如EDTA或柠檬酸盐的存在。如果重组组氨酸标签蛋白表达为包涵体，则在所有缓冲液中包括高达6M Gua-HCl或8M尿素。当使用高浓度的尿素或Gua-HCl时，通常发生蛋白质解折叠。包涵体变性复性是个很复杂的过程，一般的建议纯化可溶蛋白。

注意事项：

1.上样之，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

2.在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。

3.不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。