​明胶酶谱试剂盒文献上新啦

明胶酶谱试剂盒文献上新啦

标题《组织基质金属蛋白酶抑制剂-2的表达纯化及活性鉴定》

摘要：组织基质金属蛋白酶抑制剂-2 (TIMP-2)抑制肿瘤迁移及侵袭。文中以人TIMP-2为研究对象，探索人TIMP-2蛋白的原核表达特征，并进行纯化及活性鉴定。以人肺癌A549细胞的总RNA反转录得到的cDNA为模板，克隆人TIMP-2基因，构建pET28a重组表达载体；经酶切检测和测序分析的重组表达载体pET28a-TIMP-2转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，并对表达条件进行优化。经镍亲和柱纯化后，用Western blotting法鉴定融合蛋白His-TIMP-2，并用明胶酶谱法检测融合蛋白的活性。研究发现融合蛋白His-TIMP-2在E. coli BL21(DE3)中以包涵体的形式存在；在一定范围内，IPTG浓度对His-TIMP-2的表达量没有影响；而在该表达系统中，诱导温度和时间是关键参数，His-TIMP-2的表达量随诱导温度升高而增加；纯化并复性后的融合蛋白His-TIMP-2能有效抑制人肺癌A549细胞表达的基质金属蛋白酶的活性。具有活性的融合蛋白的获得为后续深入研究人TIMP-2的功能及机制奠定基础，并对肿瘤治疗具有重要意义。