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GENOMIC大鼠S100B蛋白ELISA试剂盒介绍
更新时间:2014-07-28   点击次数:888次

  

GENOMIC试剂盒,全部采用完整德国生物试剂工艺,*的抗体生物试剂的具有高灵敏度,重复性好的ELISA试剂盒。自从问世以来,深受广大科研用户的好评。

    下面为大家介绍一下,GENOMIC品牌的大鼠S100B蛋白ELISA试剂盒:

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中S100B蛋白(S-100B)含量

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本大鼠S100B蛋白(S-100B)水平。用纯化的大鼠S100B蛋白(S-100B)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入S100B蛋白(S-100B),再与HRP标记的S100B蛋白(S-100B)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的S100B蛋白(S-100B)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品大鼠S100B蛋白(S-100B)浓度。 

试剂盒组成 

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品(240 ng/L

0.5ml×1瓶

3

标包被

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张  

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

120 ng/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

60 ng/L

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

30 ng/L

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

15 ng/L

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

7.5 ng/L

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 

  1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀
  2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
  3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 
  6. 温育:操作同3。
  7. 洗涤:操作同5。
  8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。