加样注意事项：
取出已恢复至室温的酶标板，加入300微升洗液，以洗去包被抗体保护剂，使包被抗体处于最佳活性状态，静置浸泡30秒。洗板结束后，立即使用酶标板，不要让酶标板干燥。
排版布局H1、H2孔为空白孔，A1、A1至G1、G2为标准曲线的S1至S7孔，每孔加入50微升的Assay Buffer，根据排版，每孔加入50微升标准品和样本，加样时，垂直悬空加入液体，加完后枪头轻轻碰液面（建议标准品，样本都做复孔），最后每孔加入50微升检测抗体，加完后用封板膜小心封好酶标板，为让抗原抗体充分接触。

洗涤注意事项：

洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA 操作中，洗涤是主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。