液体样本甘油检测试剂盒这么操作更准确

上海信帆生物供应甘油检测试剂盒，可以检测的样本包括血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化为 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧 化氢；在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺，其光密度值与甘油浓度成正比。

适用范围：测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。

组成 ：

R1 试剂 40 ml R2 试剂 10 ml

4 mmol/L 甘油标准品 1 ml

4 ºC，储存 6个月。

所需设备：酶标仪、生化分析仪或 721、722 型可见光分光光度计。最佳工作波长 550nm，如 无此波长建议优先选用 570nm、次选 530、490nm。

操作步骤：

一. 样本处理： 酒类、饮品、清澈液体样本：可直接进行测定，如超过线性范围可用蒸馏水或生理盐水稀释后 再测定。

培养液：取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基，如有细胞碎片应 4ºC,，12,000g 离心 5min,

取上清进行测定。

血液：新鲜抗凝血，4ºC，2,000g 离心 5min 得到血浆；非抗凝血，先 4ºC 静置 2h 得到血清后， 2000g 离心 10min,除去血细胞。将得到的血浆/血清 70ºC 加热 10 分钟灭活內源脂肪酶，12,000g 离心 10min ,取上清测定或-20ºC 保存。

二 .工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 试剂 R1 与 1 ml 试剂 R2 混合，立即使用或 4ºC 保存

<1 天，变色弃去。

三 .标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将 4 mM 甘油标准品倍比稀 释为 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中 4~6 管即可， 注意设置 0 浓度对照反应管。

四. 甘油浓度测定：

1.参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致，减小实验误差，可先加入标准品、待测样品，然后再加入工作溶液。（注意：当甘油浓度较低时，可将待测样品与工作溶液按照   100µl:100µl体积混合，然后再进行测定，但是如果样品体积超过  100µl    时将会稀释工作液中酶的浓度，使 反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过线性范围，可进行适当稀释，然后根据稀释倍数来计算样品中甘油浓度。）

2.37ºC 或 25ºC 反应 15 分钟。反应平衡后颜色在 60 分钟内稳定。 3.先用蒸馏水+工作液的空白管调零，然后测定各管 OD 值。

4.绘制标准曲线并计算甘油浓度。

附 Excel 作图步骤：各标准管 OD 值为 y 轴，标准品浓度为 x 轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击

做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击

-选项-，点击-显示公式-和-R2    值

液体样本甘油检测试剂盒这么操作更准确