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信帆生物销售丙酮酸脱羧酶(PDC)

更新时间:2019-11-07      浏览次数:1547

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测定意义:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理:

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛,添加乙醇脱氢酶(ADH)来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+没有;通过测定340 nm光吸收下降速率,来计算PDC活性。

自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体×1瓶,﹣20℃保存。

混合试剂:临用前配制,小心把试剂四转移到试剂三中,充分溶解。

试剂六:液体×1管,4℃保存。

粗酶液提取:

称取约0.1g样品,加试剂一1 mL,冰上充分研磨,16000g 4℃离心20min,取上清液,待测。

PDC测定操作:

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃水浴中预热30min以上。

3. 空白管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A1和A2。

4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A3和A4。

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