上海信帆生物提供Western Blot实验代测服务

Western blot简介    蛋白质印记又称印记，根据抗原抗体的特异性结合检测样品中的某种蛋白的方法。它是利用特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。 Western blot的原理    Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。    以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。Western blot样本要求客户需新鲜或正确保存的蛋白样品， 检测目的蛋白的一抗（或由本公司代购）。样品要求为： 1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。 Western blot结果及数据提供内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张，可提供扫描图，实验报告，包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务，将提供检测报告Western blot实验服务服务内容我们提供从蛋白制备、蛋白电泳到Western blot检测的全流程服务，如需要还可进行灰度分析。说明1、建议提供目的蛋白阳性表达样品（纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织）作为阳性对照。2、每张膜检测1-8个样品。3、如果一抗由客户提供，请在正确条件下保存，避免污染及反复冻融。

Western Blot实验 免疫印迹实验免疫反应：

1. 用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。

2. 加入包被液，平稳摇动，室温2hr。

3. 弃包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。

4. 加入一抗（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释，液体必须覆盖膜的全部），4℃ 放置12hr以上。阴性对照，以1%BSA取代一抗，其余步骤与实验组相同。

5. 弃一抗和1%BSA，用0.01M PBS分别洗膜，5min×4次。

6. 加入辣根过氧化物酶偶联的二抗（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释），平稳摇动，室温2hr。

7. 弃二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。

8. 加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。

四、Western Blot实验 免疫印迹实验注意事项

1、Western Blot实验免疫印迹实验一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定*条件。

2、Western Blot实验免疫印迹实验显色液必须新鲜配置使用，zui后加入H2O2。

3、Western Blot实验免疫印迹实验DAB有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细。

 尊敬的客户：本公司有放射技术服务、蛋白质组学服务、组化、PCR技术服务、生物信息学数据分析等，如果您想了解Western blot的更多内容或者其他服务信息，您可以咨询上海信帆生物科技有限公司，了解更多产品的详细信息，至善至美的服务是我们永无止境的追求，欢迎新老客户放心选购自己心仪产品，我们将竭诚为您服务！

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