RT-PCR检测服务，实时荧光定量PCR检测服务

上海信帆生物专业代做RT-PCR实验，荧光定量PCR技术是普通PCR技术的改良和发展，它提高了普通PCR技术的特异性和准确性，能做到实时监控和准确定量，广泛应用于基础研究、研究检验、海关商贸检疫等各个领域。

1.技术优势：

*灵敏度高，可以检测低拷贝的目的基因

*高精度，PCR扩增阶段包括3个阶段：指数增长期，线性增长期和平台期，96个重复指数增长期表现出高精度，而平台期则变化差异较大

*定量能力强，简单的流程就能得到高质量的定量数据

*动力学范围宽，可以定量9个数量级的差异，速度快，节省时间和劳力，不需要电泳检测
*安全，使用荧光染料发光，不用EB或放射性物质，极大降低对实验人员健康的威胁
*重复性好

2.检测方法

 (1) SYBR Green Ⅰ

   游离状态下的SYBR Green分子发出微弱的荧光信号，当与dsDNA双螺旋小沟区域结合时，则发出绿色荧光，可在520nm波长下检测荧光信号，荧光信号的强度与dsDNA数量呈正相关。

SYBR Green Ⅰ染料法的特点：

   高灵敏度，低背景信号，操作简单，不影响酶促反应，价格便宜。

(2)探针法：TaqMan荧光探针，MGB探针

  TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5`末端，一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等荧光基团，而淬灭剂则在3`末端，一般为TAMRA、BHQ1、BHQ2等，其中TAMRA发出黄色荧光，BHQ1和BHQ2不发出荧光。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。

  TaqMan-MGB探针与普通TaqMan荧光探针相比具有更短的序列和更高的序列特异性，常被用于SNP分型的研究中，有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。

  RT-PCR检测服务，实时荧光定量PCR检测服务

探针法的特点：

  与染料法相比具有更低的背景信号，更高的灵敏度，可以检测低于10个分子的模板，更高的特异性，结果也更准确。同时也具有染料法的操作简单，不影响酶促反应等优点。

3.检测周期
常规检测任务2－3周内完成，具体时间根据要检测的基因和样本数而定

4.报告内容

提供电泳图片，引物调试与样本扩增相关图片（扩增曲线/溶解曲线/标准曲线），定量PCR导出的原始数据，结果的初步汇总分析以及实验报告；

5.送样要求

1、组织样本在取样后，迅速放入Trizol或RNA保存液中；

2、细胞请用培养基,Trizol或RNA保存液；

3、RNA保存液保存的样本可冰袋运输；其它保存条件请干冰运输。

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