elisa试剂盒夹心法的来由

elisa试剂盒的夹心法，是一种很常规的检测方法。它是怎么样工作的，原理，操作又是如何呢？？

1。在检测之前，两种抗体都应该被纯化，并且必须被标记。
2。对于大多数应用程序，一个聚氯乙烯（PVC）微孔板是的；然而，参考制造商的指南来决定蛋白质的结合板的zui合适的类型。
三.每口井加入约50μL抗体溶液（PBS中的20μg/L），将未标记的抗体与每个井的底部结合。聚氯乙烯将绑定约100纳克/井（300毫微克/平方厘米）。使用的抗体的数量将取决于个别化验，但如果需要zui大结合，使用至少1μg /井。这是远远高于能力的井，但绑定将发生更迅速，并结合溶液可以保存和再次使用
4。培养板在4°C允许结合。
5。用PBS清洗酶标板两次。500毫升喷瓶方便。抗体溶液冲洗可以把板在合适的容器中删除。
6。其余位点的蛋白结合在微孔板必须用封闭液孵育饱和。用3%的威尔斯/ PBS与0.02%*填充到顶部。孵化2小时通宵在室温空气潮湿。
注意：*是一种抑制剂或辣根过氧化物酶。如果HRP标记的抗体将用于检测，不包括*在缓冲液或洗涤溶液中。
7。用PBS清洗酶标板两次。
8。添加50μL抗原解酶标板（抗原溶液应滴定）。的稀释液应在缓冲完成（3%牛血清白蛋白/ PBS）。放置至少2小时，在潮湿空气中室温
9。用PBS洗盘子四次。
10、添加标记的第二抗体。在初步实验中可以确定添加量。为了准确定量，第二抗体应过量使用。的稀释液应在缓冲了。
11。潜伏在潮湿的气氛中室温2小时或更多。
12、用PBS的几种变化清洗。
13、添加基材如制造商指示。经过建议的孵育时间已经过去，在目标波长的光学密度，可以测量在ELISA板阅读器。
注意：由于潜在致癌性，一些酶底物被认为是有害的。妥善处理，并参考材料安全数据表，以妥善处理预防措施。