上海信帆生物进行酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）知识培训

大家在做elisa实验的时候，难免会遇到不同的问题，比如标准曲线不好，试剂盒的

回收率，假阴性，假阳性，实验的重复性不好等等。现在我们就来一一解答用户朋友们在实验过程中遇到的各种疑问！
 
曲线问题：
 
1.OD值不正常：试剂盒未回温，试剂盒回温到25℃
                            温度控制不好，控制正确温度
                           孵育时间不准确，控制孵育时间
                          洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加，洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干
                        阳光直射，对着风直接吹，避风避光
                        酶标仪的波长错误，酶标仪的波长450nm
                       抗体的稀释错误，正确的稀释抗体
                        水质问题，用娃哈哈矿泉水代替
 
2.白   板：洗涤液配制错误，正确的配制洗涤液
             少加液体（错加液体），正确的步骤加液体
           
 
3.无 梯 度：标准品也污染，换标准品点板
                     OD值不正常，控制温度时间在做一次
                    人为点板，不要点板/
4.线 性 不 好：OD值不正常，控制温度时间在做一次
                         
 
回收率：

1.空白管阳性高：样本本身就是阳性样本，换阴性样本做回收率
                             空白管在实验中被污染，实验中防止交叉污染
                           水质原因用，娃哈哈矿泉水代替
 
 
2.偏  高：添加量不准确，的添加量
          添加浓度不适合，添加合适的浓度
           取液吹干量多，准确的取液吹干
           取到其它相层液体，取需用相吹干
           复溶液未稀释或加入量少，正确的稀释复溶液
 
3.偏  低：添加量不准确，的添加量
          添加浓度不适合，添加合适的浓度
          取液吹干量少，准确的取液吹干
           复溶液稀释错误或加入量多，正确的稀释复溶液
          

 
 
假阴、阳性：
1，水质原因：点复溶液验证，用娃哈哈矿泉水代替
2，实验操作原因： 吸取到其它相吹干，准确的取液吹干
                  离心不*，延长离心时间
                  样本的污染，更换样本
                  乳化未处理*，温浴（70℃）处理乳化现象
3，仪器试剂原因：离心管未清洗干净，正确的洗涤器具
                  有机溶剂的影响，做试剂空白看影响结果
4，衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质）,更换衍生化试剂
5，与曲线好坏相关,，保证曲线的正常
 
 
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