α-凝血酶(冻干粉)使用原理

α-凝血酶(冻干粉)使用原理

α-凝血酶（α-Thrombin）是一种高度特异性的丝氨酸蛋白酶，由凝血酶原（Prothrombin，II因子）经蛋白水解活化而来。它在凝血过程中起着非常重要的作用，不仅能够促使纤维蛋白凝块的产生，还负责提供反馈信号来激活前辅因子：V因子和VIII因子。也可以激活XIII因子和血小板，或者用作血管收缩剂。

在体内，活化的X因子（Factor Xa）切割凝血酶原，释放出活性肽并将凝血酶切割成具有催化活性的α-凝血酶。α-凝血酶由一条轻链（A chain）（Mw~6,000）和一条重链（B chain）（Mw~31,000）通过二硫键连接而成。某些情况下，α-凝血酶会发生自溶生成β-凝血酶和γ-凝血酶。β-凝血酶由对α-凝血酶A链水解并切割含有B链糖基化位点的小片段（B1，B2）组合而成。

除了用于凝血研究之外，α-凝血酶还常用来位点特异性切割融合蛋白。基因重组时将凝血酶识别位点插入在目的蛋白与利于后续纯化和/或表达的多肽或者蛋白之间，通过凝血酶切割表达的重组子即可释放目的蛋白。凝血酶本身可通过亲和层析技术快速去除。

本品是由匀质化的人凝血酶原经由Xa因子，Va因子和磷脂活化而得，经SDS-PAGE检测确保凝血酶原的完-全活化，并以NIH凝血酶的标准品为参考，提供的酶活力不少于3091 NIH U。

使用方法（酶切体系）

产品溶于水，配成的1000 U/ml储存液，根据使用量分配于不同的离心管中，冻存于−20℃保存，凝血酶对不同的融合蛋白切割效率是不一样的，首先要进行小量切割试验。比如固定融合蛋白10ug，加不同量的凝血酶（如0.1U, 0.2U, 0.5U, 1U等), 在不同的温度(如4度, 16度, 室温或37度等)下进行试验。

建议摸好最佳条件后再进行扩大酶切实验

注意事项

1) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2) 本产品仅作科研用途!