蛋白质羰基含量测试盒的实验注意点

蛋白质羰基含量测试盒的实验注意点

（紫外比色法）

一、试剂组成和配制（50 管/24 样，货号 A087-1-1）：

试剂一：匀浆介质，无色透明液体，50mL×1 瓶；4℃保存；

试剂二：浅砖红色液体，2.5mL×1 瓶；4℃避光保存；

试剂三：黄色液体，10mL×1 瓶；4℃避光保存；

试剂四：无色液体，10mL×1 瓶；4℃保存；

试剂五：无色液体，30mL×1 瓶；4℃保存；

试剂六：无色液体，70mL×1 瓶；4℃保存；

自备试剂：无水乙醇（分析纯）；乙酸乙酯（分析纯）；

洗涤液的配制：将无水乙醇和乙酸乙酯按照体积比 1︰1

的比例混合配置成溶液，现用现配；

二、试剂组成和配制（100 管/48 样，货号 A087-1-2）：

试剂一：匀浆介质,无色透明液体，100mL×1 瓶；4℃保存；

试剂二：浅砖红色液体，5mL×1 瓶；4℃避光保存；

试剂三：黄色液体，20mL×1 瓶；4℃避光保存；

试剂四：无色液体，20mL×1 瓶；4℃保存；

试剂五：无色液体，60mL×1 瓶；4℃保存；

试剂六：无色液体，70mL×2 瓶；4℃保存；

自备试剂：无水乙醇（分析纯）；乙酸乙酯（分析纯）；

洗涤液的配制：将无水乙醇和乙酸乙酯按照体积比 1︰1

的比例配置成混合溶液，现用现配；

三、操作步骤：

1、血清(浆)前处理：取血清或血浆原液进行测定(同时用

双缩脲试剂盒（本所有售,货号 A045-1）测定血清（浆）

中总蛋白浓度)；

2、组织样本前处理：准确称取组织重量,按重量(g):体积

(mL)=1︰9 的比例加入 9 倍的试剂一(如准确称取组织

重量 0.1g 加入 0.9mL 的试剂一)，冰水浴条件下机械匀

浆，2500 转/分,离心 10min，取上清即 10%匀浆 450µL，

加入 50µL 试剂二，混匀，室温放置 10min 后，

11000r/min

离心 10min，取上清按操作表测定(同时取部分上清用考

马斯亮蓝试剂盒（本所有售,货号 A045-2）测定匀浆的

总蛋白浓度)；

四、测定意义：

一种检测蛋白质羰基含量的试剂盒。可简便、灵敏的

检测各种组织器官、血清、培养细胞（做法同组织样本）

和细胞器等蛋白质羰基含量。其使用不需要昂贵的设备，

样品处理简单，可广泛应用于各种疾病如衰老、动脉硬化

症，糖尿病和帕金森综合症、风湿性关节炎等疾病的早期

诊断，抗氧化保健食品、抗氧化药物和化妆品等的评价，

还可以用于评价由于一些环境有害因子如辐射、化学毒物

等对机体造成的氧化损伤。

五、实验注意点：

1、在用无水乙醇乙酸乙酯混合应用液对反应沉淀进行洗

涤时，漩涡混匀一定要剧烈充分，混匀时间不得少于一

分钟，反应沉淀物必须洗涤至白色，如果沉淀物还有黄

色残留，适当增加无水乙醇乙酸乙酯混合应用液的洗涤

次数，以保证洗涤充分，否则会使得测定结果偏高；

2、在进行蛋白质羰基测定时，离心的转速不可以随意降

低，否则会使得测定结果偏高；

3、在进行蛋白质羰基测定时，建议使用圆底的离心管进

行实验，这样在进行无水乙醇乙酸乙酯混合应用液洗涤

时，可以保证沉淀被充分洗涤。不建议使用尖底的离心

管进行实验。

蛋白质羰基含量测试盒的实验注意点