丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒的操作步骤

丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒的操作步骤

（Pyruvate Decarboxylase Kit，PDC 分光光度法）

一、测定原理：

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶

（ADH）来进一步催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；

NADH 在340nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340nm

光吸收下降速率，来计算PDC 活性。

二、测定意义：

PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催

化丙酮酸脱羧生成乙醛。

三、自备仪器或用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比

色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

四、试剂盒组成(50T/48 样)：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1 瓶，﹣20℃保存。

试剂五：液体×1 瓶，﹣20℃保存。

混合试剂：临用前配制，小心把试剂四和五转移到试剂三中，

充分溶解。

试剂六：液体×1 瓶，4℃保存。

五、粗酶液提取:

1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后

弃上清；按照每200 万细菌或细胞加入400μL提取

液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，工作3s，

间歇10s，工作35次），16000g 4℃离心20min，取上

清，置冰上待测。

2、组织处理：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5～

10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）

进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心20min，取上清，置

冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测

六、操作步骤:

注：ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10 3L/mol/cm；

d：比色皿光径，1cm；

V 总：反应体系总体积，1mL=0.001 L；

V 样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；

Cpr：蛋白浓度，mg/mL（需要另外测定，建议使用本

公司BCA蛋白质含量试剂盒）；

W：样本质量，g；

V 样总：加入提取液体，1mL；

细胞数：细胞总数量，10 4个；

T：反应时间，1 min。

丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒的操作步骤