生物素琼脂糖凝胶FF的使用方法是什么？

生物素琼脂糖凝胶FF的使用方法是什么？

相关介绍： 

　　生物素琼脂糖凝胶FF是一种将D-生物素键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质。该介质中的生物素配基能高度特异性亲和亲和素、链霉亲和素，亲和力非常高，可用于亲和素、链霉亲和素及其偶联物的固定化，固定化后的产品可应用于诊断检测，蛋白纯化等。也可直接用于削弱亲和力的亲和素、链霉亲和素的纯化。

技术指标：

使用方法：

1、色谱柱装填

（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

（2）在柱子下端加入蒸馏水，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的蒸馏水。

（3）将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降。

（4）柱压不超过0.3MPa，如果装柱系统中无法测柱压，则正常流速下填装。

（5）填装好的生物素琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的结合缓冲溶液平衡，建议流速100cm/h，平衡后的柱子可以用于亲和素、链霉亲和素的固定化或纯化。

2、上样

（1）缓冲液选择：一般选用pH6-8的结合缓冲液，常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl，以消除离子交换作用。在初次使用生物素琼脂糖凝胶FF时，推荐使用50mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5M NaCl，NaOH调节pH 7.4）作为结合缓冲液。

（2）样品处理：样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。为保证缓冲液一致，可以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液（常用方法有透析、超滤、脱盐柱换液等）、或用结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。

3、洗脱

（1）生物素琼脂糖凝胶FF如结合了亲和素、或链霉亲和素之后，由于亲和力非常高，通常很难洗脱，可作为固定相用于其他物质的检测或纯化，比如固定了链霉亲和素-抗原的融合蛋白可用于纯化对应的抗体。

（2）如结合了削弱亲和力的亲和素、或链霉亲和素，可在结合缓冲液中加入1-5mM的D-生物素作为洗脱缓冲液，通过竞争的方法洗脱，比如本公司的r-SA2、r-SA3、r-cSA3等产品均通过该法纯化获得。

4、除了柱层析以外，也可能通过孵育的方式固定亲和素、链霉亲和素。

5、在位清洗

（1）用于纯化时，多次使用后需要再生，本产品耐受一定的碱性，推荐使用2-5个柱体积的0.1M NaOH溶液反向清洗柱子，进行再生。

（2）其他方法，比如1-2M NaCl、70%乙醇、30%异丙醇等，也可用于该介质的再生。

生物素琼脂糖凝胶FF的使用方法是什么？