环氧-琼脂糖凝胶FF的使用方法您知道吗？

更新时间：2022-12-20

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环氧-琼脂糖凝胶FF的使用方法您知道吗？

环氧-琼脂糖凝胶FF是一种将环氧基团键合在琼脂糖微球上形成的活化层析分离介质中间体。该产品保留了琼脂糖的亲水性及大网架结构，与生物活性大分子有很好的相容性，具有高活化基团密度，适用于带适用于氨基、羟基、巯基等基团的配基的偶联，偶联效率高。

技术指标：

外观	乳白色半透明凝胶状凝胶
基质	4%琼脂糖凝胶
配体	环氧
配体密度	≥15 μmol/mL
蛋白质偶联量	≥10 mg/ml IgG
最大流速	300 cm/h
耐反压	0.3 MPa
推荐流速	50 ~ 100 cm/h
粒径范围	60 ~ 180μm
工作温度	4 ~ 40℃
基质pH稳定性	3 ~ 12（长时间）；2 ~ 14（短时间）
基质化学稳定性	在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液；1 mol/L NaOH；1 mol/L乙酸（pH 4.0）；6 mol/L盐酸胍；70%乙醇。

使用方法：

　 1. 在配基偶联前，准备好所有的样品、溶液、缓冲液等，尽量减少每一步操作之间的间隙。

　　2. 偶联前用蒸馏水洗涤10个体积以上，去除保存液。

　　3. 根据目标配基选择偶联溶液体系，一般情况下巯基偶联pH为7 ~ 9，氨基偶联pH为9 ~ 11，羟基偶联pH为＞11。

　　4. 可以在20 ~ 40℃下偶联，一般提高温度能加速偶联，在偶联效果不好的情况下，可以提高温度至35℃以上，但要考虑配基的稳定性。

　　5. 偶联时间依据反应速度而定，通常可偶联过夜（16 h）。

　　6. 偶联配基后，剩余环氧基团需要封闭，可用半胱氨酸、乙醇胺、甘氨酸等小分子试剂封闭数小时，如0.2 M Na2CO3, 0.1 M 乙醇胺, pH 10，37℃封闭16 h。

　　7. 偶联完毕，用pH 8 ~ 9、0.1 mol/LTris-HCl缓冲液和pH 4 ~ 5、0.1 M醋酸-醋酸钠缓冲液依次冲洗，循环三遍，去除未偶联的残留配基。

　　8. 偶联后的凝胶可保存在含抑菌剂的溶液中，如20%乙醇。

环氧-琼脂糖凝胶FF的使用方法您知道吗？