铁离子检测试剂盒这么操作更

铁离子检测试剂盒这么操作更准确

描述：

铁是生物体必需的元素之一，对生物体的新陈代谢和身体健康具有重要作用，血液中铁的含量不足，就会造成缺铁性贫血。铁存在于生物体的细胞内，各组织、器官包括各内分泌腺都含有铁。肝脏、脾脏和肺组织内含量较为丰富。成生物体内含铁3～5克，大部分都以蛋白质复合物形式存在，极少部分以离子的形态存在。本试剂盒采用亚铁嗪比色法可以定量细胞铁离子，线性范围5~300uM。产品包括标准品和空白对照，本试剂盒可进行100个样品的检测。

原理：

铁与蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在540-580nm处可比色测定。 其反应如下图所示：

组成：

1. 细胞裂解液： 20 ml

2. 缓冲液： 5ml

3. 检测剂： 3ml

4. 标准品： 1ml

5. 稀释用液： 20ml

储存：4℃保存，6个月有效。

适用范围：该试剂盒可用于培养细胞中铁离子定量检测。

用户自备：4.5%高锰酸钾溶液5ml（0.225g高锰酸钾溶解于5ml纯水中）

操作步骤：

1. 样品准备：

实验建议使用六孔板培养细胞。将DMEM培养过的细胞用冷的PBS 2ml洗两遍，将PBS吸弃（若不马上检测可将其冻存于-20℃）。200ul/孔（或根据实际情况适量增减）裂解液裂解细胞，置于摇床裂解2h。

2. 标准品的稀释：用试剂盒提供的稀释用液将3mM 的标准品母液稀释为：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置0浓度对照反应管。

3. 将缓冲液与4.5%高锰酸钾溶液按1:1混匀，称为混液A。

4. 参考下表使用1.5ml离心管，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高，用裂解液适当稀释后再进行测定。

5. 混匀，60℃ 孵育1h。

6. 冷却至室温，将管盖与管壁上的液滴离心入管底。

7. 加入30ul 铁离子检测剂，混匀，室温孵育，30min。此步可能产生络合物沉淀，用移液器轻轻吹打即可溶解，若沉淀不溶，12000rpm离心5分钟，取上层清液即可。

8. 取200ul 于96孔板，在550nm测定吸光度。如果不能测定550nm，也可以在540nm~580nm范围内检测。

9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。

说明：

1. 本试剂盒不受锰离子、镁离子、镍离子和锌离子等的干扰。
2. 操作过程中，样品与试剂等避免与铁器接触，以防污染。

3. 所测样本的值曲线的上限，应稀释样品后重新测定。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，检测试剂有腐蚀性，请小心操作，若不慎沾到皮肤上请马上用清水冲洗干净。

5. 该试剂盒仅供科学研究使用。