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冻干补体,血清总补体如何正确使用
更新时间:2020-09-01   点击次数:888次

冻干补体,血清总补体如何正确使用

上海信帆生物供应冻干补体,规格为0.5ml一只,一盒10只,使用的时候用蒸馏水复溶,产品现货供应,欢迎大家咨询!

使用方法:每支加0.5ml蒸馏水复溶,静置10分钟后轻轻摇匀;滴定时用缓冲生理盐水或缓冲液(不能含NaN3)做1:5-10倍稀释使用,临用现配。

稳定性:4-8℃保存3年(暗处保存)

用途:总补体溶血活性(CH50)检测使用

产品规格:0.5ml/支*10

注意事项:请穿戴实验服及一次性手套操作。

血清总补体溶血活性(CH50)测定方法一、原理利用绵羊细胞与相应抗体(溶血素)结合成的复合物,可激活血清中的补体,导致红细胞溶解,当红细胞和溶血素量一定时,在规定反应的时间内,溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血(CH50)时,二者之间近似直线关系,故以50%溶血作为敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的小补体量为一个CH50U,可计算出待测血清中总的补体溶血活性,以CH50U/ml表示。

本实验主要反映补体经典活化途径的溶血功能,其结果与补体C1~C9各组成分的量及活性均有关。

二、试剂及配制

1.缓冲生理盐水:(1)贮存液:Na2HPO4.12H2O2.85gKH2PO40.27gNaCl17.00g蒸馏水定容至100ml4℃保存备用(2)应用液:5ml贮存液加95ml蒸馏水,再加10%硫酸镁0.1ml,当日配制,12小时内使用。

2.2%绵羊红细胞:无菌采取绵羊血液,于等量Alsever液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次,并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。

3.溶血素:将绵羊红细胞溶血素(效价1:4000),用应用液做1:2000倍稀释(即1ml溶血素加1999ml应用液)。

4.待测血清:新鲜血液室温放置30min,再4℃放置60min,使血收缩,4℃离心(3000r/min)10min,取上清,-20℃保存。

三、操作步骤试管法(改良Mayer法)

1.致敏羊红细胞:2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素(1:2000),混匀,置37℃水浴30min。

2.稀释血清:待测血清0.2ml,加应用液3.8ml,稀释度为1:20。

3.配制溶血标准管:全溶血管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水,混匀。50%溶血管:取全溶血管液2ml加缓冲液2ml。

4.按表所示,依次加各成分于试管中,混匀,置37℃水浴30min,第10管为非溶血对照:补体CH50测定试管法

5.结果测定:取出试管,2000r/min离心10min,对照管应不溶血。肉眼比色,选与50%溶血标准管相近二管,再用分光光度计测(波长542nm、0.5cm比色杯)OD值,确定与标准管接近者为终点管,然后按下公式计算CH50值:血清补体CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀释度。如第5管为终点管,测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。

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