明胶酶谱法试剂盒细胞样本该如何处理

 

　　明胶酶谱法试剂盒操作简单，灵敏度高。上海信帆生物供应的MMP试剂盒采用酶谱法（zymography）检测MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一种广为使用的、基于SDS-PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法,而且可检测几百个样本。

 

　　基质金属蛋白酶MMP2/MMP9明胶酶谱试剂盒，其中脱色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V），很多老师不明年这里面的冰醋酸是什么，我们今天给大家讲解一下。这个冰醋酸不是醋酸也不是乙酸，冰醋酸也叫冰乙酸，就是纯的无水乙酸。不过我们选择常规的98%乙酸也是可以的。

 

　　明胶酶谱法试剂盒细胞样本应该如何处理：细胞样本用PBS，5倍体积震荡裂解,估算细胞的体积，然后加入5倍体积的PBS，涡旋振荡15-30s,而后静置或低速离心。或者手动震荡。明胶酶谱法试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一种广为使用的、基于SDS-PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5μl血液中的MMP-2、MMP-9酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测，如果小胶加样孔为10~15个，则总计可检测500~750个样品。