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明胶酶谱法试剂盒细胞样本该如何处理
更新时间:2019-05-29   点击次数:633次
   明胶酶谱法试剂盒细胞样本该如何处理
 
  明胶酶谱法试剂盒操作简单,灵敏度高。上海信帆生物供应的MMP试剂盒采用酶谱法(zymography)检测MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一种广为使用的、基于SDS-PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM,高于ELISA方法,而且可检测几百个样本。
 
  基质金属蛋白酶MMP2/MMP9明胶酶谱试剂盒,其中脱色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(V:V:V),很多老师不明年这里面的冰醋酸是什么,我们今天给大家讲解一下。这个冰醋酸不是醋酸也不是乙酸,冰醋酸也叫冰乙酸,就是纯的无水乙酸。不过我们选择常规的98%乙酸也是可以的。
 
  明胶酶谱法试剂盒细胞样本应该如何处理:细胞样本用PBS,5倍体积震荡裂解,估算细胞的体积,然后加入5倍体积的PBS,涡旋振荡15-30s,而后静置或低速离心。或者手动震荡。明胶酶谱法试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一种广为使用的、基于SDS-PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶,含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳,电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育,凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-2、MMP-9的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9特异蛋白底物及酶学反应缓冲液,可检测少至0.1~0.5μl血液中的MMP-2、MMP-9酶谱及活性,检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测,如果小胶加样孔为10~15个,则总计可检测500~750个样品。