胎牛血清采血方法及保存
1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛,经剖腹获取小牛。
2、将小牛清洗干净后,侧放在万级洁净房间内的采血台上,固定四肢及头部。
3、用来苏水清洗心脏外部,刮去心脏外部牛毛,露出心脏外部一侧皮肤,用2%碘酒擦拭消毒。
4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口,取出近心血管,先用2%碘酒消毒,再用75%的酒精消毒,用止血钳夹住血管,切开1厘米左右的切口进行插管,插好管后打开血管的止血钳,让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。
5、采血瓶采血前经干烤灭菌(180℃2小时)后,按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口,于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。采血前先晃动瓶内生理盐水,使其充分湿润瓶壁后倒出,再进行采血并加塞封口。将采血后的采血瓶放37℃恒温室2小时,再放入4℃冷库4小时以备离心。
采集后的胎牛血清需要冷冻保存，那么在下一次使用的时候，如何解冻呢？下面就来说说胎牛血清解冻过程。
(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
(2)血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4)勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
(5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
(6)若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
