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信帆生物推出：免疫组化实验检测服务，欢迎！免疫组化实验代测找上海信帆生物，您身边的实验专家！

我们在做免疫组化实验的时候，总是会遇到这样那样的问题，上海信帆生物告诉大家免疫组化实验过程中操作的要点具体是什么？

1.固定：用 4% 的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。 
Bouin S 固定液：饱和苦味酸 750ml ，甲醛 250ml ，冰醋酸 50ml ，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。 
PLP 液：即高碘酸钠 - 赖氨酸 - 多聚甲醛，适于固定石蜡切片。适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。 
2 ．组织脱水，透明：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。 
3 ．切片时展片：有些组织在切片后难以在水中展开，这时可适当地在水中加入几滴乙醇。 
4 ．烤片： 60℃ 30 分钟或 37℃ 过夜，温度太高或时间太长，抗原容易丢失。 
5 ．蜡块及切片的保存：在 4℃ 保存 
6 ．脱片问题： Poly-L-Lysine( 多聚赖氨酸 ) 为目前免疫组化染色工作中zui常用的一种防脱片剂， 6ml 的多聚赖氨酸溶液可按 1:10 稀释成 60ml 的工作液，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如不行，可用双重处理（ APES 和 Poly-L-Lysine ）的切片。在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前，放在 APES 1 ： 50 丙酮溶液中浸泡 3 分钟，晾干，即可进行下一步。 
7 ．灭活内源性酶： HRP 系统： 3% 双氧水灭活； AP 系统： 3%HAc 灭活。 
8 ．暴露抗原：对于石蜡切片的免疫组化实验时，必须采用高温加热抗原修复，这将有助于暴露抗原决定簇，从而增加免疫组化染色的强度 ( 不同抗体的*修复液请参阅抗体说明书 ) 。对于不同的组织，不同的抗原，不同的抗体，所采用的方法应不一样，可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。 
9 ．封闭：在山羊血清封闭，非特异性染色仍然较强时，可延长封闭时间或用浓缩血清封闭 
10 ．抗体稀释：应遵循 “ 现用现配 " 的原则，对于 PBS 稀释的抗体一定要当天使用。 
11 ．背景高：在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下，如果背景依旧高，可采用含 1‰ Tween20 的 PBS 洗，特别是在显色之前要多洗。 
12 ．返蓝：在苏木素复染后，可用碱性缓冲液（如 PBS ）或 Na2HPO4 的饱和溶液返蓝。 
13 ．显色：一定要在显微镜下观察，注意控制背景。

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