WB实验代测实验步骤

更新时间：2018-04-17

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　　WB实验代测实验步骤

　　1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)

　　可以使用适当的裂解液，例如Western及IP细胞裂解液、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提，例如细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

　　收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。

　　2.电泳(Electrophoresis)

　　(1)SDS-PAGE凝胶配制

　　SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制

　　(2)样品处理

　　在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制

　　(3)上样与电泳

　　冷却到室温后，把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。