基质金属蛋白酶MMP2/9活性检测试剂盒,明胶酶谱法注意事项

     基质金属蛋白酶MMP2/9活性检测试剂盒,明胶酶谱法注意事项

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      我们在做明胶酶谱法实验的时候，总是会遇到很多这样那样的问题，那么这个基本原理是什么，我们操作过程中应该注意哪些问题呢，上海信帆生物为您答疑。

      酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1％明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲 系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，zui后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在 蓝色背景下可出现白色条带，条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。
 
        复性原理：在电泳过程中，SDS与样品中的MMPs结合（当然是可逆性结合），破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用，而只有当将胶置Trition中洗脱（是放在摇床上摇，30min／次，做2次或15min/次，4次。静置于Trition中是不妥的。）时，由于SDS被Trition结合而去除，从而使MMPs恢复了活性。

操作注意事项：

1.试剂盒的操作方法同WB是一样的

2.试剂盒的阳性对照，是选用全血做对照，具体如下操作如下：

阳性对照（可选步骤）：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl全血与100μl 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer等体积混合，取5-15μl上样。

3.在操作孵育的时候，建议孵育5小时

4.本试剂盒可以检测MMP2/9活性，同时可以测定PROMMP2/9，可根据实验需要，选取观察。

5.本试剂盒上样蛋白建议20ug。

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