1 、获取细胞或组织裂解物
1）根据检测蛋白的位置选择合适的裂解buffer；
2）选择合适的蛋白酶抑制剂，避免蛋白降解，从而检测的准确性。
2 、蛋白定量
3 、电泳分离蛋白质
4 、转膜：根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。
5 、封闭：去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。
6 、一抗孵育
一抗的选择成功与否，是整个
WB实验代测成功的关键，选择一抗有以下几个注意点：
1）选择适合检测标本种属的一抗；
2）选择适用于WB实验方法的一抗；
3）选择单克隆抗体或者经过亲和纯化的多克隆抗体。
7 、二抗孵育：孵育条件一般为室温1-2小时。
8 、底物孵育：选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量。
9 、结果分析和检测：凝胶成像系统检测或者暗室曝光到胶片。
更新时间：2015-04-28 
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