ELISA方法 捕获HCMV pp65特异性IgM抗体检测病毒活动性感染

  建立ELISA抗体捕获法用于检测HCMVpp65特异性IgM，以确定感染状态，为HCMV活动性感染诊断试剂盒的研发提供理论和实验依据。方法：将HCMVAD169株感染HF细胞，粗提HCMV抗原；通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和Western-blotting筛选出HCMVpp65抗原，测定pp65抗原效价及其和特异性抗体的亲和力：用辣根过氧化物酶（HRP）标记HCMVpp65单克隆抗体（McAb）。通过抗人μ链包被微量滴定板，先后加待检血清和pp65抗原-酶标McAb复合物，建立ELISA捕获HCMVpp65特异性IgM抗体方法学。用该法检测30份儿童、30份孕妇和28份免疫缺陷者的研究血清样本，并用DIESSE公司酶免疫HCMV IgM检测试剂盒同步检测。结果：制备的HCMV-pp65抗原PAGE胶上位于65KD Marker处，呈单一条带，抗原效价为1：100；HRP-MCAb免疫双扩效价为1：32；检测系统各反应物的*稀释度为抗人μ链0． 75μg／孔，待检血清为1：100，HCMV抗原为1：100，HRP-McAb 1：20：两种方法的各组阳性率分别为6． 7％、13． 3％、10． 7％和10％、13． 3％、14． 3％，总符合率为91％。结论：建立了简便、快捷、特异性和敏感性均较高的ELISA捕获HCMV pp65特异性IgM抗体法，其检测结果与DIESSE公司酶免疫HCMV IgM检测试剂盒的总符合率为91％。可用于儿章、孕妇和免疫力低下者，诊断HCMV活动性感染。