新城疫间接ELISA抗体检测试剂盒的研究介绍

       利用新城疫弱毒Clone30株病毒抗原．通过间接ELISA方法对试剂盒的各项反应条件进行系列的摸索试验后，成功地组装了检测试剂盒。 对ELISA各项反应条件进行摸索，并确定了zui适工作条件，研究结果表明，新城疫病毒抗原*包被浓度为1.086ug／ml，zui适包被条件为4℃过夜，被检血清*稀释度为1∶100，酶标结合物*工作浓度1∶800。待检血清和酶标二抗的反应时间均为37℃ 30分钟，底物的反应时间为37℃ 15分钟。采用已确立的ELISA反应条件，检测14份经西班牙海博莱公司的NDV-ELISA试剂盒检测为阴性的血清，依据阴阳性临界值=阴性血清OD平均值+3SD，确定阴阳性临界值为0.34。用Lasota株全病毒进行阻断试验结果表明，Lasota株病毒能够阻断阳性血清与包被的Clone30株病毒的结合反应。用此方法检测E.coli的O_1、O_2、O_（78），AI H_9，EDS_（76），IBD的单因子鸡血清，均为阴性，无交叉反应，说明建立的ELISA具有很好的特异性。用已建立的ELISA和西班牙海博莱公司的NDV-ELISA试剂盒同时对64份血清样本进行检测，检测结果表明，建立的ELISA方法的特异性和敏感性分别为90％和93.2％。同时，用已建立的ELISA方法与HI方法对80份血清样本进行检测，结果表明ELISA的效价对数与HI效价对数呈线性回归关系，二者的相关系数（r）为0.91。试剂盒的保存期试验结果表明，试剂盒可以保存到三个月。 本研究建立了一种经济、快速、准确的检测方法，为我国进行ND的血清学检测和流行病学调查提供了良好的技术手段，为该试剂盒的进一步开发和商品化奠定了较好的基础。