液体样本甘油检测试剂盒可以检测哪些样本

液体样本甘油检测试剂盒可以检测哪些样本

信帆生物供应的，液体样本甘油检测试剂盒可以检测体液、细胞培养基、血液、酒类饮料等液体样本。

原理：在ATP存在下，甘油会在甘油激酶催化下转化为 3 - 磷酸甘油；该产物经甘油磷酸氧化酶催化氧化，同步生成过氧化-氢；过氧化-氢在过氧化物酶催化下，与显色底物发生反应生成苯醌亚胺有色物质，该有色产物在特定波长下的吸光度数值，与样品内甘油浓度呈正比例关系。

适用范围：测定各类样本中（例如：体液、细胞培养基、血液、酒类饮料）的甘油含量。

试剂盒组成 ：

操作步骤：

样本处理： 

A 类：酒水、饮料等澄清液态样品

无需预处理可直接上机检测；若样品甘油浓度超出试剂盒检测上限，使用蒸馏水或生理盐水稀释后重新测定，最终结果换算时计入稀释倍数。

B 类：细胞培养液样品

选用无酚红、无色、不含血清的培养液；若培养液内存在细胞沉淀，4℃、12000g 离心 5 分钟，吸取上层澄清液体待测。

C 类：血液样品

抗凝新鲜血液：4℃、2000g 离心 5 分钟，得到血浆； 未抗凝全血：4℃环境静置 2 小时析出血清，随后 2000g 离心 10 分钟去除血细胞。 分离得到的血浆 / 血清置于 70℃水浴加热 10 分钟，灭活样品内源脂肪酶，完成后 12000g 离心 10 分钟，取上清液检测，剩余上清可置于 - 20℃低温长期保存。

工作溶液配制：按试剂1：试剂2= 4:1 比例，取 4 ml 试剂1 与 1 ml 试剂 2 混合，立即使用或 4ºC 保存 <1 天，如发生变色弃去。

标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将2 mM 甘油标准品倍比稀 释为 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6 管即可， 注意设置 0 浓度对照反应管。

甘油浓度测定：

1. 按照下表配比完成加样操作；为统一各组反应时长、降低实验误差，建议先加入标准品、待测样品，最后统一添加工作液。 补充说明：甘油浓度偏低的样品，可将待测样品与工作液采用 100μl:100μl 等体积混合，然后再测定；若样品添加体积超过 100μl，会稀释工作液中有效酶浓度，造成检测灵敏度下降。如果待测样品浓度超出线性范围时，需提前稀释，检测结果乘以稀释倍数得到原始浓度。

2. 恒温孵育：25℃或 37℃条件下反应 15 分钟，反应平衡后颜色在 60 分钟内稳定。

3. 空白调零：使用蒸馏水搭配等量工作液制备空白管，用空白管吸光度数值完成仪器归零，再依次读取所有标准管、样品管 OD 吸光值。

4. 定量计算：依据梯度标准液浓度与对应 OD 值绘制标准曲线，代入样品吸光度计算样品甘油实际浓度。

1. 正常血清中甘油浓度区间为 20~130μmol/L；细胞培养检测时，培养液必须选用无酚红、无色无血清类型；若培养液含有酚红色素，需同步准备不含细胞、仅含酚红的空白培养液作为对照扣除背景干扰。

2. 易干扰显色读数、造成检测结果失真的物质：维生素 C 含量高于 0.18g/L、血红蛋白浓度高于 2g/L、胆红素浓度高于 0.25g/L，二硫苏糖醇、巯基乙醇、高浓度 EDTA 缓冲盐体系均会干扰检测结果。

液体样本甘油检测试剂盒可以检测哪些样本