免疫电泳磷酸盐缓冲液 (pH8.6) 2025年药典的正确使用方法

免疫电泳磷酸盐缓冲液 (pH8.6) 2025年药典的正确使用方法

该缓冲液在免疫电泳实验中主要有两个用途，使用方法有所不同：

用途一：作为电泳槽缓冲液

稀释使用：药典明确指出，用于电泳槽的缓冲液应是上述配制液的 10 倍稀释液。

配制方法：取 1 份上述浓缩的缓冲液母液，加入 9 份纯化水，稀释 10 倍，混匀。

例如：取 100 ml 母液，加入 900 ml 水，得到 1000 ml 的工作液。

注入电泳槽：将稀释好的工作液倒入电泳槽的正、负两极槽中，液面高度需符合电泳仪的要求（通常需浸过电极）。

注意事项：

一致性原则：电泳槽左右两槽中的缓冲液液面应保持在同一水平，否则会产生虹吸现象，导致区带歪斜。

重复使用：为节省试剂，同一批缓冲液可多次使用（通常 3-5 次）。但若发现缓冲液 pH 值变化过大、离子强度改变（如因蒸发导致液面下降）或明显污染，应立即更换新液。

用途二：作为琼脂糖凝胶的制备缓冲液

直接使用：配制琼脂糖凝胶时，应使用未经稀释的上述缓冲液母液。

例如：配制 1% 的凝胶，称取 1 g 琼脂糖，加入 100 ml 缓冲液母液中。

加热溶解：在微波炉或水浴中加热，使琼脂糖全溶解澄清，注意不要沸腾过度以免水分蒸发。

浇板：待凝胶冷却至约 50-60°C（不烫手但尚未凝固时），将其浇注在水平放置的玻璃板或胶片上，插入合适的样品梳，室温下静置凝固。

核心注意事项与常见问题

pH 值的精确性：pH 8.6 是此方法的核心参数。pH 偏差会直接影响蛋白质的带电性质和迁移速率，导致电泳条带扭曲、扩散或结果不可重复。每次使用前，尤其是重复使用的槽液，建议重新检查 pH 值。

离子强度：缓冲液的离子强度由配方中的盐浓度决定。离子强度过高会产生大量热，可能导致蛋白变性；过低则会导致电泳区带扩散、条带变宽。请严格按照配方配制，不要随意更改盐的用量。

“搭桥"：在将凝胶板放入电泳槽时，需要用滤纸或纱布等“桥接"材料连接凝胶和槽中的缓冲液。桥接物需全浸透，并与凝胶接触紧密，否则会导致电流不均。

缓冲液体系一致：为确保电场环境一致，凝胶中和电泳槽中必须使用相同离子成分和强度的缓冲液。这就是为什么槽液是凝胶缓冲液的 10 倍稀释液的原因。绝对禁止在凝胶中使用一种缓冲体系，而在电泳槽中使用另一种。

安全操作：操作电泳仪时，务必注意用电安全。在连接或取放凝胶时，确保电源是关闭状态。

总结

正确使用免疫电泳磷酸盐缓冲液 (pH 8.6) 的关键可归纳为：

精准配制：严格按药典配方称量，最后务用 pH 计校准至 pH 8.6。

区分用途：

制胶用 -> 使用浓缩母液（未稀释）。

电泳槽用 -> 使用10倍稀释的工作液。

保持一致性：确保凝胶与电泳槽缓冲液体系一致。

勤于验证：每次实验前，检查缓冲液 pH 和状态，及时更换不合格的缓冲液。

遵循以上步骤，即可满足2025版中国药典对免疫电泳实验的基本要求，为获得清晰、可靠的结果奠定基础。

免疫电泳磷酸盐缓冲液 (pH8.6) 2025年药典的正确使用方法