丁酰胆碱酯酶(B-CHE)测定试剂盒的操作过程

丁酰胆碱酯酶(B-CHE)测定试剂盒的操作过程

（比色法）

一、测定原理：

丁酰胆碱酯酶水解丁酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成 TNB 黄色化合物，根据

颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可以反应胆碱酯酶的活力。

二、试剂组成及配制(50T/24 样)：

试剂一：标准品，粉剂×3 支，4℃保存。

1μmol/ml 标准品应用液的配制：取标准品一支加生理盐水 10ml 混匀，现用现配。

试剂二：底物粉剂×2 支，用时每支粉剂加生理盐水 20ml，现用现配，配好后 4℃保存两周。

试剂三：显色剂贮备液，3ml×1 支，4℃保存，用时以生理盐水 1︰9 稀释，配成显色应

用液。需多少配多少，也可以一次配成 30ml，避光冷藏。保存期 3 个月。

试剂四：抑制剂，液体×1 支。打开后可以装在空的小塑料瓶内（附空瓶一只），室温保存。

试剂五：透明剂，液体 6ml×1 支。室温保存。

生理盐水：60ml×2 瓶，室温保存。

三、操作过程：

1、样本前处理：

组织样本:准确称取组织重量,按重量(g)：体积(ml)=1：9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下

机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清，即为 10%匀浆上清液;

血清样本：取抗凝全血 1000～1500 转/分钟，离心 10 分钟，取上层血浆。也可测血清，测时将血清(浆)

用生理盐水 1︰19 稀释；

全血样本：取 0.1ml 抗凝全血加生理盐水至 10ml 按 1︰99 稀释，取 a ml(一般取 0.1ml)检测，每个样本

取样前必须充分混匀。

3、参考取样量：

①、大鼠血清测试前用生理盐水 20 倍稀释，参考取样量为 30～50μl。

②、10%脑组织匀浆的参考取样量为 30～50μl。

③、1︰99 稀释后的全血稀释液取 0.1ml。

五、本法优点：

1、灵敏度高。微量样品即可测出丁酰胆碱酯酶的水平。

2、可以分型。另有配套试剂盒可测乙酰胆碱酯酶。

3、方法简便快速，准确稳定。

4、不需气相色谱等仪器，只要一般分光光度计即可。

丁酰胆碱酯酶(B-CHE)测定试剂盒的操作过程