ELISA实验中细胞样本的收集和处理方法

细胞上清

需保证各组间培养细胞的数量基本一致，细胞生长状态良好。建议采用6孔板培养细胞，并保证细胞数量达到106左右，即细胞密度达70%-80%左右，即可收集培养液，于2-8℃、1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片，取上清检测。

细胞裂解液

贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200μL PBS重悬（推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低，可减少PBS的体积），并通过反复冻融或超声，使细胞破碎。将提取液于2-8℃、1500×g离心10分钟，取上清检测。

■ 反复冻融：-80℃放置1h/液氮放置0.5h，然后置于30℃水浴锅中，轻微振荡，使其迅速融化，此操作反复2-3次即可。

■ 超声方法：用超声波发生器，以振幅14μm超声处理30 s，在冰水浴条件下，破碎细胞；或者使用超声波破碎仪，200 W，2 s/次，间隙3 s，总时间5 min。

样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂，常规推荐PMSF：工作浓度:17~174μg/mL(0.1~1mM)。

细胞培养过程中，有许多条件需要摸索，包括细胞类型、培养基组分、细胞数量、生产状态、干预条件和物质等。前期基础打得牢固，对后续ELISA或其他种类实验的开展，及结果的分析，具有更多的参考意义。

ELISA实验中细胞样本的收集和处理方法