实时荧光定量PCR检测服务的用途及常见问题
更新时间：2020-12-22 点击次数：1120次
一、
实时荧光定量PCR检测服务的用途：
1、基因表达研究：对β地中海贫血症患者β与γ珠蛋白mRNA水平进行检测，其结果特异性强、定量准确，为了解β地中海贫血的分子病理机制及其研究诊断提供了可靠的检测数据。
2、转基因研究：利用两种发光探针及适当的循环阈值，扩增一个转移后的基因和一个对照基因，以分析转基因老鼠接合性。
3、该方法为多个转基因动物的同型结合及异质结合提供了明确的鉴定结果。通过实时定量PCR检测，同型结合的异质接合动物交配后其子代中转基因的传递情况符合孟德尔遗传规律。
4、这项技术在转基因动物繁育及基因剂量功能效应实验中将有很大的用途。
5、单核苷酸多态性及突变分析：实时荧光定量PCR一个诱人的应用前景是用于检测基于两条探针和基因组的不稳定性。
6、基因突变基于两条探针，一条探针横跨突变点，另一条为锚定探针，与无突变位点的靶序列杂交。两条探针用两种不同的发光基团标记。
7、如靶序列中无突变，探针杂交便*配对，如有突变，则探针与靶序列不*配对，会降低杂交体得稳定性，从而降低其熔解温度。这样便可对突变和多态性进行分析。
二、实时荧光定量PCR检测服务的常见问题：
1、引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性。
2、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的浓度做起。
3、模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
4、扩增效率低:反应条件不够优化，设计更好的引物或探针、改用三步法进行反应、适当降低退火温度、增加镁离子浓度等。
5、PCR各种反应成分的降解或加样量不足。
6、PCR产物太长：一般采用标准的产物长度。
7、加样存在误差：使得标准品不呈梯度。
8、标准品出现降解：应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品。
9、引物或探针不佳：重新设计更好的引物和探针。
10、模板中存在抑制物，或模板浓度过高。
11、引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
12、引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。
13、镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix试剂盒。
14、模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。
总结：实时荧光定量PCR检测服务的用途及常见问题小编就分享到这了，看完本文您就应该有了基本的认识和了解相信大家都明白了吧！总的来说，希望对大家有所帮助。
