浅析WB实验代测的4个条件及注意事项
更新时间：2020-04-13 点击次数：2063次
一：
WB实验代测的4个条件：
1、凝胶洗脱：转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来，如果蛋白质还截留在凝胶中，将无法在膜上进行分析。
2、处理期间仍截留在膜上：在转移后的处理过程中蛋白质必须保持吸附在印迹膜上。
3、吸附到膜上：在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上，如果蛋白不吸附，将无法在膜上进行分析。
4、处理过程中可接近：被吸附的蛋白质必须能够与检测试剂接触，如果蛋白质被掩盖则无法检测。
以上是小编为大家讲解的产品代测的四个条件，那么小编接下来进一步讲解基本过程及注意事项有哪些？
二：WB实验代测的基本过程：
1、获取细胞或组织裂解物。
2、根据检测蛋白的位置选择合适的裂解。
3、选择合适的蛋白酶抑制剂，避免蛋白降解，从而保证检测的准确性。
4、蛋白定量。
5、电泳分离蛋白质。
6、转膜：根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。
7、封闭：去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。
8、一抗孵育。
三：WB实验代测需要注意以下几点：
1、选择适合检测标本种属的一抗。
2、选择单克隆抗体或者经过亲和纯化的多克隆抗体。
3、选择适用于WB实验方法的一抗。
4、二抗孵育：孵育条件一般为室温1-2小时。
5、结果分析和检测：凝胶成像系统检测或者暗室曝光到胶片。
6、底物孵育：选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量。
以上就是小编为大家介绍的全部内容，希望对大家有所帮助。
