IMAC(His) 预装柱的使用方法-上海信帆生物

上海信帆生物供应IMAC(His) 预装柱，产品质量稳定，价格实惠，深受广大科研用户青睐！

建议使用高纯度的咪唑，高纯度的咪唑在280nm的吸光值较低，甚至不显示吸光值。缓冲液中咪唑的佳浓度因蛋白的浓度和性质而异。

如果重组His标签蛋白是以包涵体的形式表达，建议在各缓冲液或样品中添加6M盐酸胍或8M尿素。使用高浓度的尿素或盐酸胍，有可能引起蛋白变性，变性蛋白可以实现复性。

当纯化柱所需柱压明显升高时，则需要清洗，清洗方法如下：

a. 用至少5~10倍体积的100mM EDTA清洗柱体；

b. 用10倍体积的1.5M NaCl清洗柱体；

c. 用10倍体积的蒸馏水清洗柱体；

d. 用0.2M NaOH处理1~2小时（清除内毒素需12小时）；

e. 用10倍体积的蒸馏水清洗柱体；

f. 用2倍体积0.1~0.5%的非离子去污剂（溶于0.1M醋酸）处理1-2小时；

g. 用5倍体积70%的乙醇清洗柱体；

h. 用10倍体积的蒸馏水清洗柱体。

保存温度：

用20%的乙醇在中性pH值的条件下冲洗介质和柱子，在4℃~8℃条件下储存。

应用实例：

哺乳动物细胞表达的HIS标签蛋白，其细胞分泌上清通过IMAC(His)柱进行富集浓缩，高效地纯化回收。

图例）

泳道1：上样；

泳道M：Protein Marker；

泳道3：流出；泳道4：洗脱1；

泳道5：洗脱2；泳道6：洗脱3。

产品描述:

螯合的Sepharose，当带有Ni2+离子时，如果形成氨基酸残基的复合物，特别是组氨酸残基被暴露在蛋白质表面时，可以选择性的结合蛋白质。(His)6融合蛋白可以很容易的结合到亲和柱上，然后用含有咪唑的缓冲液进行洗脱。 

产品用途：

His融合蛋白的纯化。

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