红细胞裂解液（RBC Lysis Buffer,10×） 操作步骤

红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) 操作步骤：

注意：绝大多数情况下，应使用无菌去离子水稀释RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式细胞术除外。

A、组织细胞样本的常规操作

1、制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞悬液，离心弃上清。

2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～2min。 3、离心，弃红色上清。本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。

5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。4℃离心，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。

B、组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)

1、制备细胞悬液：新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，制备细胞悬液，离心弃上清。

2、裂解：加入细胞5倍细胞沉淀体积的1×RBC Lysis Buffer，轻柔吹打混匀裂解。

3、加入PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。

4、离心5min，弃红色上清，本离心步骤亦可在室温下操作。

5、如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤2～4各一次。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

C、血液样本的常规操作

1、取新鲜抗凝血，离心，弃上清。

2、 裂解：加入1×RBC Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～5min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3、离心：弃红色上清。本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤2和步骤3一次。

5、洗涤： 根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀；4℃离心，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

D、血液样本的快速操作(无需洗涤)

1、新鲜抗凝血中加入10倍体积的1×RBC Lysis Buffer，轻轻吹打混匀，裂解4～15min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

2、加入 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。

3、离心，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤2和步骤3一次。

5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

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