WB实验中关于抗体选购的几个注意事项，上海信帆生物提供Western Blot检测服务，下面我们就Western Blot几个常规问题进行解答！

Q：如何选择各个公司的抗体？
A：抗体可尽量选择进口原装抗体，如Abcam，CST，Santa cruz等公司的抗体。根据靶蛋白的种属（如人，小鼠，大鼠等）以及实验用途（WB，免疫组化，细胞免疫荧光等）在各个公司的网页上选择合适的抗体。选择抗体时务必注意核对基因NCBI的序列号，以防止因为基因的别名等原因导致买错抗体。另外再购买抗体时需注意是否提供完善的售后服务，在厂商规定的时间内未能得到预期的实验结果可将详细的实验信息交给抗体公司进行质量投诉，一般提供充分的实验数据并且在保质期内可以得到抗体调换等售后服务。

Q：抗体使用有哪些注意事项？
A：使用抗体前需仔细阅读说明书，了解抗体的保存条件以及不同用途下的推荐稀释比例。较高浓度的抗体（>0.5mg/mL）通常性质更稳定，受生物试剂工艺和成本控制等因素影响，不同品牌的抗体的浓度也不相同，所以购买时应注意比较，经验不足的实验者往往被抗体的体积迷惑，要注意相同质量下低浓度的抗体体积反而更大。

Q：为什么各个抗体都要进行 WB预实验？
A：对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗，与抗原更加有效的结合，从而获得特异性和非特异性背景之间差异的大化。每一个抗体都有其特性，因此我们必须通过WB预实验获得背景小，非特异性条带少的实验结果。

预实验的内容如下：

1）确定一抗的稀释比例和孵育时间；

2）选择合适的封闭液及封闭时间；

3）调节合适的上样量，使内参条带灰度值趋于一致。

Q：半干转和湿转的优缺点有哪些？如何选择？
A：半干转和湿转两种转膜方式各有优劣。湿转适合所有的蛋白尤其分子量大的蛋白，转膜效率佳，但对试剂消耗量较大，转膜时间长于半干转；半干转适合分子量小于100KD的蛋白，省时、省试剂。

Q：什么是WB的灰度半定量分析？
A：通常用Image J 或photoshop软件对各个样本的目的蛋白及其内参蛋白曝光后胶片的灰度值进行计算，按照灰度值的高低来半定量分析各个样品中蛋白的表达差异。

Q：WB进行几次重复实验？
A：我们常规报价的服务内容为进行预实验（摸索实验条件）并提供一次正式实验WB胶片结果。预实验一般会对封闭条件，抗体浓度，孵育时间等条件进行多次重复以获得一次优的正式实验结果。客户若要求进行2-3次的生物学重复实验，请在签订合同前特别说明，我们会根据工作量的增加收取相应的费用。

WB实验中关于抗体选购的几个注意事项