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技术文章/ Technical Articles

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  • 2016

    5-4

    在细胞中,蛋白质并不是孤单的个体。大多数蛋白通过与分子伴侣或其他蛋白形成复合物而发挥其功能。因此,在了解细胞的生物学特性时,蛋白质相互作用(PPI)研究就成了重要一环。在药物开发的过程中,这一信息也至关重要,有助于确认药物靶点。一提起蛋白质相互作用研究,你的脑海中可能马上浮现出:酵母双杂交、免疫共沉淀等技术。的确,这些都是经典方法,可有效检测体内体外蛋白质相互作用。然而,它们不能提供动态的蛋白相互作用信息,似乎还缺乏一些说服力。基于此,共振能量转移这种方法受到人们的青睐。这种...

  • 2016

    5-3

    痛风发作会在人体关节部位引发炎症和剧烈疼痛,但过了一段时间后,炎症通常会自动减弱,疼痛感也逐渐消失。这为何会发生?德国研究人员发现,原因在于一种人体免疫细胞的“自杀式攻击”。痛风的病因是体内嘌呤物质新陈代谢紊乱,导致尿酸合成增加、排出减少,造成高尿酸血症。血液中尿酸浓度过高时,尿酸会以微小的钠盐结晶(俗称痛风石)形式析出,积累在关节、软骨和肾脏中,引发炎症。德国埃尔朗根大学近日发表研究公报称,其研究人员发现,人体免疫系统的嗜中性粒细胞在抗击痛风引发的炎症中发挥了关键作用。实验...

  • 2016

    5-2

    Dmem(A)细胞培养基(粉末型)成分序号化合物名称含量(mg/L)序号化合物名称含量(mg/L)1无水氯化钙.2H2O265.0018L-丝氨酸42.002硝酸铁.9H2O0.1019L-苏氨酸95.003氯化钾400.0020L-色氨酸16.004无水硫酸镁97.6721L-酪氨酸72.005氯化钠6400.0022L-缬氨酸94.006无水磷酸二氢钠109.0023D-泛酸钙4.007丁二酸75.0024酒石酸胆碱7.208丁二酸钠100.0025叶酸4.009L-盐酸...

  • 2016

    4-28

    Q:westernblot中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么?A:脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜,避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。Q:请问封闭液和抗体稀释液用BSA和脱脂奶粉有什么区别呢?有人跟我说奶粉的封闭效果更好些,但是通常只能用于WesterBlot,如果要做elisa或者phagedisplay时候,蛋白铺板的话,不能使用脱脂奶粉。可是也有人说可以,请问是否有这个说法呢?A:所谓封闭是用以减少或消除载体上的非特异性结合蛋白的分...

  • 2016

    4-27

    考马斯亮兰G250与蛋白质结合,在0-1000ug/ml范围内,于波长595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250与蛋白质结合迅速,结合产物在室温下10分钟内较为稳定,是一种较好的蛋白质定量测定方法。1.实验部分1.1仪器与试剂:LabtechUVPOWER紫外分光光度计;玻璃比色皿一套;考马斯亮蓝G250;牛血清蛋白;超纯水。1.2试液的制备:牛血清蛋白标准溶液(1000ug/ml)的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中,加...

  • 2016

    4-26

    (一)、仪器设备1)18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;2)水浴锅(二)、试剂1)pbs缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl137mmol/L,KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L,KH2PO41.4mmol/L。2)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。3)0.5mol/LEDTA缓冲液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10mmol/LNaOH调至pH...

  • 2016

    4-25

    三月二十日,来自中科院广州生物医药与健康研究院、武汉菲沙基因信息有限公司(Frasergen)和加拿大西蒙佛雷泽大学的研究人员,在学术期刊《JournalofBioLogicalChemistry》发表学术论文,该研究检测了iPSC生成及随后基因校正过程中的基因组不稳定性,指出重编程和基因打靶可能会产生大量但却不同的基因组变化,因此,在iPSC诱导时及基因打靶之后,必须进行严格的基因组监控和选择。本文通讯作者是中科院生物医药与健康研究院研究员潘光锦博士,其2002年硕士毕业于...

  • 2016

    4-23

    关于293/293T细胞1、种属都为人,不是鼠。2、来源:293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高,转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。3、形态为上皮细胞,能致瘤。4、染色体核型:亚三倍体人细胞系。染色体众...

  • 2016

    4-22

    一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。*,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(*抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,将抗原放大,由于抗体...

  • 2016

    4-20

    实验原理:PCR扩增是模拟天然DNA复制过程,利用DNA聚合酶在体外(试管中)扩增一对引物之间特异性DNA片段的方法。其主要热循环过程可分为三个步骤:(1)高温变性(denature):提供DNA复制的有效模板。(2)低温退火(anneal):引物与模板DNA复性,提供游离3’-OH端供DNA复制起始;(3)中温延伸(extend):依赖Mg2+,DNA聚合酶催化合成与模板互补的新的DNA分子。以上变性、退火、延伸三个过程组成一个循环周期;常循环25~40周期,经过n轮循环后...

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