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白介素10(IL-10)ELISA试剂盒检测前准备工作

更新时间:2017-09-19      浏览次数:899
   白介素10(IL-10)ELISA试剂盒检测前准备工作
  白介素10(IL-10)ELISA试剂盒检测之前需要做哪些准备工作?下面就让小编带您做个简单的了解。
  1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡20分钟;每次检测后剩余试剂请及时于2~8℃保存。
  2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
  3.标准品:加入标准品稀释液0.25ml至冻干标准品瓶中使IL-1β终浓度达到250pg/ml,静置15分钟后轻轻混悬待*溶解,用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(标准曲线取七个点,zui高浓度为250pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.)
  白介素10(IL-10)ELISA试剂盒洗涤方法:
  自动洗板机或人工洗板:每孔洗涤液为300ul,注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。zui后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
  实验过程需自备的材料:
  1.不同规格的加样枪及相应的枪头;2.酶标仪;3.自动洗板机;4.去离子水或双蒸水;
  白介素10(IL-10)ELISA试剂盒操作步骤:
  1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃。
  2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
  3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中,用封板胶纸封住反应孔,室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本,请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本,如稀释量大,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
  4.洗板5次,且zui后一次置厚吸水纸上拍干。
  5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,室温孵育60分钟。
  6.洗板5次,且zui后一次置厚吸水纸上拍干。
  7.加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,避光室温孵育20分钟。
  8.洗板5次,且zui后一次置厚吸水纸上拍干。
  9.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温孵育20分钟。
  10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
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