猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒-爱德士（IDEXX）

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒说明书

(HerdCheck* PRRS X3)

名称和用途

HerdCheck* PRRS X3 抗体检测试剂盒是用于检测猪血清和血浆中的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的酶联免疫检测试剂盒。

概述

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种动脉炎病毒，在80 年代后期在欧洲和美国发现，两种毒株具有不同的抗原性1。该病毒引起繁殖问题（ 产弱仔，死胎， 母猪死亡）、呼吸系统疾病（肺炎，呼吸困难，行动迟缓，死亡）和轻度神经症状1。猪繁殖与呼吸综合征引起严重的经济损失，被认为是影响养猪业zui重要的疾病之一。可以通过便捷的检测血清或血浆中的抗体评估猪只是否感染PRRSV（无论是自然感染或人工免疫疫苗）。需要注意的是这种检测抗体的免疫学方法需要对不同的PRRS 毒株的检测都很敏感。

此试剂盒仅供体外检测使用。

原理

HerdCheck* PRRS X3 抗体检测试剂盒是用于检测猪血清和血浆中PRRSV IgG 抗体的酶联免疫吸附试验。将重组的PRRSV抗原包被在微孔滴定板上，被测样品在包被孔中孵育时，针对PRRSV的特异性抗体与包被的抗原形成抗原抗体复合物，洗去包被孔中没有结合的成分后，加入辣根过氧化物酶（HRPO）标记的抗猪抗体，它与孔中的猪抗体结合，在试验的zui后步骤，洗去没有结合的酶标抗体，再加入酶底物和显色剂TMB，颜色反应的深浅由样品中存在的抗PRRSV 特异性抗体的量决定。

试剂

所有试剂于2-8℃保存。

1. 重组PRRS 抗原包被板 5 块

2. PRRSV 阳性对照 4 ml

3. 阴性对照 4 ml

4. HRPO 标记抗猪IgG 抗体 60 ml

5. 样品稀释液 120 ml

A. 10 倍浓缩洗涤液 235 ml

B. TMB 底物液 60 ml

C. 终止液 60 ml

自备器材

适合 5-1000 μl 的微量移液器或连续移液器

一次性移液器吸头

量筒，500 ml，配制洗涤液用

96 孔板酶标仪

蒸馏水或去离子水

滴加和吸去洗涤液的设备

吸液用的真空和控制装置

样品稀释的管子

使用注意事项

处理所有的生物材料，可能为潜在的传染源。

不要用口移液。

使用样品或试剂盒的场所不要吸烟，喝水和吃东西。

TMB 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，避免底物与皮肤和眼睛接触。

TMB 不要暴露于强光或任何氧化剂。取用TMB 显色液要用洁净的玻璃或塑料容器。

所有的试剂应在2-8℃储存。使用前拿到室温（18-25℃），使用后放回2-8℃储存。

所有的废弃液应在丢弃前合理处理，以免污染。

注意防止试剂盒内的试剂污染。

不要使用过期的试剂，不同批次的试剂盒成分不要混用。

严格遵守操作说明可以获得结果。操作过程中移液、定时和洗涤等全部过程必须。

每次检测时都要设立阴阳性对照。

在检测过程中，仅使用去离子水或蒸馏水稀释和准备试剂。

未用完的微孔板/条应用塑料袋密封并储存于2-8℃。

仅供兽医使用。

试剂的准备

用样品稀释液40 倍稀释被测样品（例如：5 μl 样品加195 μl 样品稀释液）。

注意：不要稀释阳性和阴性对照。

取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在添加到PRRSV 包被板前应混匀。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（18-25℃），并摇动使沉淀盐溶解。使用前浓缩洗涤液应用蒸馏水或去离子水10 倍稀释（例如：每块反应板需要30 ml 浓缩洗涤液加入270ml 蒸馏水或去离子水中）。

操作步骤

使用前所有试剂应恢复至室温（18-25℃）。试剂应轻轻旋转或振荡混合。每个样品使用一个独立的吸头。

1. 取出抗原包被板，在记录表上记录样本的位置。

2. 在包被孔内加入100μl 没有稀释的阴性对照，每次检测加两孔。

3. 在包被孔内加入100μl 没有稀释的阳性对照，每次检测加两孔。

4. 在相应的孔中加入100μl 已稀释好的样本。

5. 18-25℃孵育30±2 分钟。

6. 吸取各孔的液体弃入废液筒。

7. 用大约300 μl 洗涤液洗涤板孔，共洗涤3-5 次。每次洗涤后应吸去孔内的液体。注意：应避免包被孔干燥。在zui后一次洗涤液吸去后，将每块板中残留的洗涤液扣拍到吸水材料上。

8. 每孔加入100 μl 辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG 抗体。

9. 18-25℃孵育30±2 分钟。

10. 重复步骤6 和7。

11. 每孔加入100μl TMB 底物液。

12. 18-25℃孵育15±1 分钟。

13. 每孔加入100μl 终止液，终止反应。

14. 测量并且记录样本和对照的吸光值A(650)。

15．计算结果。

结果

符合下列条件，试验方能有效：

阳性对照的平均值减去阴性对照的平均值必须大于或等于0.150；此外，阴性对照的平均值（NCx）必须小于或等于0.150。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，应按照操作说明书重做一次试验。PRRS 抗体的阳性/阴性通过计算样品与阳性对照（S/P）的比值进行判定。具体计算方法见样品结果计算部分。

结果计算

1．阴性对照平均值的计算（NCx）：

NCx=(NC1 A650+ NC2 A650) /2例如：（0.064+0.08）/2=0.072

2．阳性对照平均值的计算（PCx）：

PCx=(PC1 A650+ PC2 A650) /2 例如：（0.560+0.596）/2=0.578

3．样本/阳性对照比率的计算（S/P）:

S/P=(样本A(650)－NCx) /(PCx－NCx)

例如：如果样品的A（650）=0.750， S/P=（0.750-0.072）/(0.578-0.072)=1.34

结果阐述

PRRS 抗体的有无（阳性/阴性）通过计算每个样品的S/P 值判定。

1. 如果S/P 值低于0.4，样品应判定为PRRS 抗体阴性。

2. 如果S/P 值大于或等于0.4，样品应判定为PRRS 抗体阳性。