RIPA裂解液的详细介绍，RIPA裂解液*

RIPA 裂解缓冲液 (RIPA Lysis Buffer)

描述： RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经 典和zui常用的细胞组织快速裂解液。使用 RIPA Buffer 制备用于 Western 特别是用于免疫共沉淀的 裂解产物已经是一种首选的标准操作，也适用于大部分抗原表位的检测，特别是免疫共沉淀等实验。

组成： 100 ml RIPA Buffer：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

储存：4  ℃保存 制备细胞裂解产物

1. 800g 4℃离心 5 分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells

=~100 ml PCV）；

2. 每 50～100 ml PCV 加入 5 倍体积 RIPA 裂解缓冲液（250~500 ml）,冰浴放置 10 分钟，并每隔

5 分钟在漩涡混合仪上振荡 30 秒；

3. 12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；

 注意：假如所得蛋白产物较为粘稠，可先 95℃加热 5 分钟，迅速冰浴 5 分钟，然后再进行步骤 3

制备组织裂解产物

1. 取 50-100 mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的 PBS 洗涤 2 次离心弃去 PBS；

2. 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；

3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆 20-40 次，直到 95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置 10 分钟，并每隔

5 分钟在漩涡混合仪上振荡 30 秒；

4. 12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；

 注意：假如所得蛋白产物较为粘稠，可先 95℃加热 5 分钟，迅速冰浴 5 分钟，然后再进行步骤 4

说明：

1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；

3. 在该 RIPA 裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择添加。