GENOMIC试剂盒之大鼠Ⅰ型胶原蛋白对骨髓间充质干细胞作用

       上海信帆生物科技有限公司生物实验室，通过ELISA实验探讨体外条件下分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞的有效方法,对所获细胞进行培养,观察细胞的生物学特性，以及用GENOMIC试剂盒检测Ⅰ型胶原蛋白含量对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用。

        此方法实验由实验室的王主任和张研究院负责进行。首先采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓间充质干细胞,用贴壁培养法对所获细胞进行培养、传代、纯化和扩增,观察细胞的生物学特性,倒置相差显微镜观察细胞的形态学特征,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞术鉴定细胞表面标志物;将分离纯化的大鼠骨髓间充质干细胞培养于Ⅰ型胶原蛋白上面,对细胞的碱性磷酸酶表达、细胞矿化形成钙化结节的能力进行测定。 结果分离的细胞1天后*贴壁,贴壁的细胞平均10d后形成细胞克隆,所获细胞形态均一,呈成纤维细胞样生长,细胞稳定表达骨髓间充质干细胞表面标志物。在Ⅰ型胶原蛋白上面培养后,细胞碱性磷酸酶显著表达,Von.Kossa染色可见矿化结节形成。

      结论密度梯度离心法分离,贴壁培养法培养所得细胞,可以有效分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞。用此种方法获得的细胞具有骨髓间充质干细胞的特性。Ⅰ型胶原蛋白能够促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化。