微生物鉴定中常用的生化反应

微生物鉴定中常用的生化反应

实验原理：

1. 有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。

2. 细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8（红）——8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。

3. 某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则培养基可由原来固体状态变成液体状态。

4. 牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可分三种情况：（1）酸凝固作用：细菌发酵乳糖后，产生许多酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固，此称为酸凝固。（2）凝乳酶凝固作用：某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。通常这种细菌还具有水解蛋白质的能力，因而产生氨等碱性物质，使石蕊变蓝。（3）胨化作用：酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透明的液体。胨化作用可以在酸性条件下或碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原褪色。

小妙招：

1.如何解释淀粉酶为胞外酶而非胞内酶：淀粉为大分子物质，进入细胞很困难，甚至需要高耗能的胞吞作用，因而通过胞外酶的作用，将淀粉水解为较小分子葡萄糖后再运入细胞内，不需要高耗能的胞吞作用。

2. 碘液的作用：由于淀粉经过水解会生成葡萄糖，葡萄糖为多羟基醛，因此可以利用醛这个基团的特征性质进行验证，比如银镜反应，斐林试剂等，呈阳性说明淀粉水解产生葡萄糖。阴性则说明淀粉没有被水解。

注意事项：

1. 在淀粉水解实验中，观察各种细菌的生长情况，加入碘液时要轻轻旋转，使得碘液均匀铺满整个平板。

2. 每个实验需要设置阴性和阳性对照组，以保证实验结果。

3. 细胞生长较快，需要及时观察和记录。

4. 接种前要用记号笔做好标记，接种时要